細胞:ARO細胞
中文名稱:人甲狀腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
ARO細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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JCB核孔轉運時間和效率取決于輸入素的濃度
在出核轉運過程中具有出核轉運信號肽(Nuclear export signal,NES)的核轉出蛋白(簡稱NES蛋白)存在于細胞核內。(通派細胞庫供應:RGC-5細胞株)首先NES蛋白如CRM1(一種NES蛋白,出核因子-1,Exportin 1)與核內生物大分子如hnRNA等結合,然后與RanGTP結合形成復合體跨核膜轉運進入細胞質。
轉運過程中會出現hn RNA的5’末端已經在胞質中而 hn RNA的3’末端還留在細胞核內,(通派細胞庫供應:661W細胞株)同時該復合體還結合有hnRNA 5’帽結合蛋白CBP20/80,此外伴隨hnRNA的出核轉運hnRNA也會發生轉錄后的加工修飾,使hnRNA變為成熟mRNA。
胞質中出核復合體RanGTPase作用下解離為RanGDP和CRM1,(通派細胞庫供應:DLD-1細胞株)釋放出成熟mRNA。CRM1直接返回細胞核內,此時CRM1可再參與下一輪其它hnRNA分子的出核轉運。
核轉運蛋白中有一段保守的氨基酸序列與核質轉運有關,如SV40大T抗原蛋白分子的NLS序列,(通派細胞庫供應:Siha細胞株)其氨基酸序列為PKKKRKV,PKAI抑制蛋白的NES序列為LALKAGLDI,這些序列保證了核轉運蛋白核轉運的正確定向,實際上NLS或NES的氨基酸保守順序可能還有其它一些種類。
NLS或NES蛋白結構除有與轉運導向有關的氨基酸信號序列外,(通派細胞庫供應:NIH:3T3細胞株)還有與生物大分子相結合的結合域起核轉運的載體作用。