原理　　　　細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。　　　　傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。　　　　二、材料和試劑　　　　 ATCC細胞傳代培養(yǎng)1、細胞：貼壁細胞株　　　　2、試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）　　　　3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等　　　　三、操作步驟　　　　1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。　　　　2、加入0.5―1ml0.25％胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。　　　　3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1―3分鐘。　　　　4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。　　　 ATCC細胞傳代培養(yǎng)　附：消化液配制方法：　　稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達0.02％。

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ATCC細胞傳代培養(yǎng)

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