酵母細胞的培養 

一、實驗目的
1．掌握酵母細胞的培養方法
2．學會使用相差和微分干涉顯微鏡

二、異源互補技術概述
釀酒（芽殖）酵母的培養在許多方面可以與大腸桿菌相比較。這種酵母可以用標準的微生物學技術在液體和固體培養基中進行培養。大多數酵母菌株在復合液體培養基中的倍增時間為90～120min，到靜止期時細胞滴度為3×108到5×108細胞/mL。單個細胞在復合固體培養基上經過36 hr可長成1～2mm的單菌落，在合成的有限培養基中生長較慢，倍增時間至少增加為原來的兩倍，且細胞的zui終滴度僅達到2×107到3×107細胞/mL。在有限培養基平板上菌落需大約60 hr才能長成容易計數的大小。在復合或有限培養基上生長的菌落能影印培養或轉移到膜上，進行分子水平的分析。
非洲粟酒裂殖酵母和其近親釀酒酵母一樣，是一種子囊真菌，但它與發芽酵母的關系并不密切，兩種酵母的蛋白質序列和基因同源性在60﹪到90﹪。與釀酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是單倍體細胞，可分為兩種交配型，在饑餓情況下不同的交配型單倍體進行交配，形成雜合的雙倍體合子。雙倍體合子經過減數分裂形成4個孢子，由孢子發芽而長成單倍體菌落。非洲粟酒裂殖酵母具有典型的真核生物的細胞周期，包括G1、S、G2和M 四個時期。在基本或復合培養基中其世代時間為2到4個h，其中G2期占細胞周期的70﹪，其它期各占10﹪。

三、材料、試劑和儀器
1． 材料
釀酒芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）和非洲粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces kephir）。

2． 試劑

人紅細胞刺激因子（ESF）ELISA 試劑盒 
人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子（TRANCE）ELISA 試劑盒 
人生長激素釋放因子（GH-RF）ELISA試劑盒 
人巨噬細胞趨化因子（MCF）ELISA 試劑盒
人α/β干擾素受體（IFN-α/βR）ELISA 試劑盒 
人B細胞生長因子（BCGF）ELISA 試劑盒 
人B細胞分化因子（BCDF）ELISA 試劑盒 
人上皮細胞粘附分子（Ep-CAM/CD362）ELISA 試劑盒 
人可溶性粘附分子（Sam）ELISA 試劑盒 
人巨噬細胞替代激活相關化學因子1（AmAC-1）ELISA 試劑盒 
人可溶性血管內皮生長因子受體2（VEGFR-2/sFLK-1）ELISA 試劑盒 
人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）ELISA 試劑盒 
人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISA試劑盒 
人多效生長因子（PTN）ELISA試劑盒 
人可溶性CD28（sCD28）ELISA試劑盒 
人淋巴細胞因子ELISA 試劑盒
人胸腺活化調節趨化因子（TARC/CCL17）ELISA 試劑盒 
人神經細胞粘附分子配體1（NCAM-L1/CD171）ELISA試劑盒 
人神經保護因子（CVNPF）ELISA 試劑盒 
人可溶性腫瘤壞死因子α受體（sTNFαR）ELISA試劑盒 
人可溶性細胞因子受體（sCKR）ELISA試劑盒 
人可溶性凋亡相關因子配體（sFASL）ELISA 試劑盒 
人細胞凋亡抑制因子（IAP）ELISA 試劑盒 
人集落刺激因子（CSF）ELISA 試劑盒 
人γ干擾素誘導單核細胞因子（MIGF/CXCL9）ELISA 試劑盒 
人干擾素誘導T細胞趨化因子（ITAC/CXCL11）ELISA 試劑盒 
人CD14分子（CDl4）ELISA 試劑盒 
人凋亡誘導因子（AIF）ELISA 試劑盒 

1）釀酒芽殖酵母的培養基
（1）YPD（YPED）液體培養基（用于酵母菌搖培，100mL）
細菌培養用蛋白胨（Bacto-peptone） 2g
細菌培養用酵母提取物 （Bacto-Yeast extract） 1g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose貯液單獨滅菌,4℃保存） 2g
加ddH2O至90mL，調pH值至4-5，定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時，加入5mL預熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。

（2）YPD（YPED）固體培養基（可用于保菌或培養，100mL）
在YPD液體培養基的營養物中加入2g瓊脂粉，加ddH2O至90mL，調pH值至5.8，定容至95mL，高溫滅菌（121℃, 15min）。待溫度降至55℃時，加入5mL預熱（至少室溫放置30min）無菌的40％ detrose貯液。

（3）YPAD（斜面）培養基（可用于保菌或培養營養缺陷菌株，100mL）
在YPD液體培養基中加入硫酸腺嘌呤（Adenine hemisulfate salt，腺嘌呤半硫酸鹽）40mg，瓊脂（Bacto-agar）（液體培養基不加）2g。加ddH2O至90mL，調pH值至5.8（液體調至4左右），定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時，加入5mL預熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。分裝培養基，傾斜放置形成斜面，每支試管依大小可加入3-5mL培養基。（若葡萄糖直接加入培養基則可先分裝至試管后滅菌（需要棉塞），滅菌會造成葡萄糖碳化，培養基略變褐色，對酵母培養會略有影響）。該培養基用于4-6個月的短暫保菌或酵母培養。

人白細胞共同抗原（LCA/CD45）ELISA 試劑盒 
人CD4分子（CD4）ELISA 試劑盒 
人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白（P-cad）ELISA 試劑盒 
人角化細胞生長因子（KGF）ELISA 試劑盒 
人血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）ELISA試劑盒 
人CXC趨化因子配體16（CXCL16）ELISA 試劑盒 
人CXC趨化因子受體3（CXCR3）ELISA 試劑盒 
人γ干擾素誘導蛋白16/p16（IFI16/p16）ELISA 試劑盒 
人基質細胞衍生因子1a（SDF-1a/CXCL12）ELISA 試劑盒 
人淋巴細胞趨化因子（Lptn/LTN/XCL1）ELISA 試劑盒 
人α干擾素（IFN-α）ELISA試劑盒 
人可溶性CD86（B7-2/sCD86）ELISA 試劑盒 
人白介素27（IL-27）ELISA試劑盒 
人白介素23（IL-23）ELISA試劑盒 
人巨噬細胞移動抑制因子（MIF）ELISA試劑盒 
人組織因子途徑抑制物（TFPI）ELISA 試劑盒 
人干擾素誘導蛋白10（IP-10/CXCL10）ELISA 試劑盒 
人白介素1（IL-1）ELISA 試劑盒 
人白介素17（IL-17）ELISA 試劑盒 
人白介素1β （IL-1β）ELISA 試劑盒 
人表皮生長因子（EGF）ELISA 試劑盒 
人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）ELISA試劑盒 
人巨噬細胞炎性蛋白5（MIP-5）ELISA試劑盒 
人可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA 試劑盒 
人可溶性細胞間粘附分子1（sICAM-1）ELISA試劑盒 
人細胞間粘附分子2（ICAM-2/CD102）ELISA 試劑盒 

2）非洲粟酒裂殖酵母的培養基
（1）YE培養基（100mL）
酵母提取物 0.5g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose貯液單獨滅菌，4℃保存） 2g
細菌培養用瓊脂（Bacto-agar） 2g
加ddH2O至90mL，調pH值至5-6，定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時，加入5mL預熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。