人肺細胞HLF-a細胞株說明
DNA分子帶負電,從瓊脂糖凝膠的負極向正極泳動,速度依賴于其分子質量。小的緊密的DNA分子的較大伸展片斷容易穿過瓊脂糖介質。依據所要分離的DNA分子的大小來選擇瓊脂糖的濃度,例如質量濃度3mg/ml的瓊脂糖用來做DNA大片段電泳( 20 000堿基)而0.8%只能電泳小的片斷。
要注意以下幾點:
1、 用移液搶將樣品加至點樣孔。每孔點樣的體積一般少于25ul,因此吸取每一個樣品時,操作要穩當且細心。
2、 常加一定量的蔗糖來增加樣品的濃度,以使每個樣品停留在各自的點樣孔中。
3、 在樣品中加入水溶性的陰離子追蹤染料(如溴酚藍),用以看出樣品移動的距離。
4、 在一個或幾個孔中加入標準分子質量樣品,電泳結束后,根據已知分子質量的帶的相應位置可用來做出標準曲線。
5、 電泳一般是在追蹤染料泳動到膠的80%部位時停止。注意電泳期間,電泳槽蓋要安全蓋好,以防止液體蒸發,又可以降低電擊的可能性。
6、 電泳結束后,將膠浸沒在1mg/L的溴化乙錠(EB)中,5min后即可看到DNA帶,EB通過插入在雙螺旋的配對核苷酸之間同NDA結合。另一種方法是電泳時,在膠中加入EB。
7、 在紫外燈下,由于EB發出強烈的橘紅色的熒光,所以可以看到DNA帶。利用這種方法檢測的界限是每條帶約10ng DNA。帶上塑料安全眼鏡可防止紫外光對眼睛的傷害??捎贸咦觼頊y量每條帶至點樣孔的距離。同樣,利用特制的照相機和調焦器,也可以對凝膠拍照。
8、 如果要對某一條帶(如質粒)進一步分析,可用小刀將含該帶的凝膠切割下來,從帶中回收DNA。
人肺細胞HLF-a細胞株說明
人胚肺成纖維細胞MRC-5
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纖維細胞WI-38
SV-40Z轉化肺成纖維細胞WI38/VA13
人胚肺二倍體細胞2BS
人胚肺二倍體細胞KMB-17
人肺細胞HLF-a
人小細胞肺癌細胞DMS 153
人胚肺細胞 VA13細胞WI-38 VA13亞系 2RA
人胚肺二倍體細胞HEL-1
人胚肺細胞系KuMA
人肺轉化細胞系AE1201
人肺鱗癌細胞NCI-H226
人胚肺二倍體細胞HEL-2
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B
人胚肺轉化細胞SL-1
人肺腺癌細胞Calu-3
人小細胞肺癌細胞NCI-H209
人低分化肺腺癌細胞GLC-82
人小細胞肺癌細胞NCI-H446
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H157
人肺鱗癌細胞NCI-H520
人肺巨細胞癌高轉移細胞株PG-BE1
人肺巨細胞癌低轉移細胞株PG-LH7
人肺癌細胞A-427
人低分化肺腺癌細胞SK-LU-1
人肺支氣管癌細胞NCI-H1650
人肺細胞HLF-a細胞株說明
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H1975
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087
人小細胞肺癌細胞NCI-H2227
人非小細胞肺癌細胞NCI-H23
人肺腺鱗癌細胞NCI-H596
人非小細胞肺癌細胞NCI-H838
人肺鱗癌細胞LTEP-s
人小細胞肺癌細胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺鱗癌細胞NCI-H1703
人肺鱗癌細胞NCI-H2170
人非小細胞肺癌細胞NCI-H524
人肺腺癌細胞SPC-A1
人肺癌細胞A549
其他注意事項:
1、 瓊脂糖:不同廠家、不同批號的瓊脂糖,其雜質含量不同,影響DNA的遷移及熒光背景的強度,應有選擇地使用。
2、 凝膠的制備:凝膠中所加緩沖液應與電泳槽中的相一致,溶解的凝膠應及時倒入板中,避免倒入前凝固結塊。倒入板中的凝膠應避免出現氣泡,以免影響電泳結果。
3、 電泳緩沖液:為保持電泳所需的離子強度和pH,應常更新電泳緩沖液。
4、 樣品加入量:一般情況下,0.5cm寬的梳子可加0.5μg的DNA量,加樣量的多少依據加樣孔的大小及DNA中片段的數量和大小而定。當加樣孔大時,樣品上樣量應相應加大,否則會造成條帶淺甚至辯認不清;反之則應適當減少加樣量,但是上樣量過多會造成加樣孔超載,從而導致拖尾和彌散,對于較大的DNA此現象更明顯。
5、 DNA樣品中鹽濃度會影響DNA的遷移率,平行對照樣品應使用同樣的緩沖條件以消除這種影響。DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度,遷移分子的形狀及大小。采用不同濃度的凝膠有可能分辨范圍廣泛的DNA分子,制備瓊脂糖凝膠可根據DNA分子的范圍來決定凝膠的濃度。小片段的DNA電泳應采用聚丙烯酰胺凝膠電泳以提高分辨率