MRC-5細胞   人胚肺細胞 細胞鑒定說明

 觀察家禽巴氏桿菌病的臨診表現和病理解剖變化
   掌握禽巴氏桿菌病的微生物學診斷方法

2．實驗內容或原理
根據典型癥狀和病變，以及在顯微鏡下檢查組織涂片發現的兩極染色的桿菌，可初步診斷本病。但確診應依靠病原分離鑒定，病原分離鑒定原理為革蘭氏染色法。

3．需用的儀器或試劑等
動物：雞、小白鼠
器材：外科鑷子、外科剪、滅菌紗布、載玻片、糖發酵管等。
藥品：草酸銨結晶紫、革蘭氏碘、碳酸復紅、瑞特氏染液、美藍染液、棉拭子、接種環、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纖維二糖、綿子糖、菊糖、赤蘚糖、戊五醇、M—肌醇、水楊苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、瓊脂粉、酚紅。

MRC-5細胞   人胚肺細胞 細胞鑒定說明

4．實驗步驟

一、臨床癥狀和病理變化

⒈ 癥狀
   急性癥狀:描述
   慢性癥狀:描述

   病理變化:描述

二 、微生物學診斷

JEG-3    人絨毛膜癌細胞
JeKo-1    人套細胞淋巴瘤細胞
Jurkat, Clone E6-1    人T淋巴細胞白血病細胞
K-562    人慢性髓原白血病細胞
K7M2 wt [K7M2-WT]    小鼠骨肉瘤成骨細胞
Kasumi-1    人紅白血病細胞
KB    人口腔表皮樣癌細胞
KP-N-NS    人腎上腺神經母細胞瘤細胞(腦轉移)
KU812    人外周血嗜堿性白血病細胞
L Wnt-3A    小鼠皮下結締組織細胞
L1210    小鼠白血病細胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)    小鼠淋巴瘤細胞
MRC-5細胞   人胚肺細胞 細胞鑒定說明

L6    大鼠成肌細胞
L6565    小鼠白血病克隆細胞系
Lec1    倉鼠卵巢細胞
Li-7    人肝癌細胞
LLC    小鼠肺癌細胞
LLC-MK2    恒河猴腎細胞
LNCaP clone FGC    人前列腺癌細胞
LoVo    人結腸癌細胞
LS 174T    人結腸腺癌細胞
LTEP-a-2    人肺腺癌細胞
M-20     人胚胎成纖維細胞
M-22     人胚胎成纖維細胞
M-7     人胚胎成纖維細胞
MC3T3-E1 Subclone 14    小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14
MCF7 [MCF-7]    人乳腺癌細胞
MDA-MB-231    人乳腺癌細胞
MDA-MB-415    人乳腺腺癌細胞
MDA-MB-435S    人乳腺導管癌
MDA-MB-436    人乳腺腺癌細胞
MDA-MB-453    人乳腺癌細胞
MDA-MB-468    人乳腺癌細胞
MDBK (NBL-1)    牛腎細胞
MDCK(NBL-2)    狗腎細胞
ME-180    人子宮頸表皮癌細胞
MEG-01     人成巨核細胞白血病細胞
MFC    小鼠胃癌細胞
MG-63    人骨肉瘤細胞
MGC80-3    人胃癌細胞
MLTC-1    小鼠睪丸間質細胞瘤細胞
MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]    人骨肉瘤細胞
MOLT-4    人急性淋巴母細胞白血病細胞
Mo-MuLV/3T3     小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞
MR1 [derivative of HB-11048]    中國倉鼠X小鼠B淋巴細胞雜交瘤
MRC-5    人胚肺細胞
MS1    小鼠胰島內皮細胞
MS751    人子宮頸表皮癌細胞
MSTO-211H    人肺癌細胞株
Mv.1.Lu(NBL-7)    貂肺上皮細胞
NAMALWA    人Burkitt's淋巴瘤細胞
NCI-H1299    人非小細胞肺癌細胞
NCI-H1395    人肺腺癌細胞
NCI-H1650    人非小細胞肺癌細胞
NCI-H1688      人經典小細胞肺癌細胞
NCI-H1975    人肺腺癌細胞
 
NCI-H292    人肺癌細胞(淋巴結轉移)
NCI-H358    人非小細胞肺癌細胞
NCI-H446 [H446]      人小細胞肺癌細胞
NCI-H460 [H460]    人大細胞肺癌細胞
NCI-H661    人大細胞肺癌細胞
NCI-H716 [H716]    人結直腸腺癌細胞

 抹片的制備
    用鑷子夾持病變組織肝或脾，然后以滅菌剪刀剪取小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層；若取血液，用滅菌剪刀剪開心臟進行蘸取或剪取凝血塊，用新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層。自然干燥。將干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上來回通過數次，略作加熱進行固定。

 革蘭氏染色法
    固定好的抹片上滴加草酸銨結晶紫色液，染色2min→水洗+加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脫色1min→水洗→加稀釋碳酸復紅復染30s→水洗→吸干→鏡檢。巴氏桿菌為革蘭氏陰性球桿菌或短桿菌，單個或成對存在，常有莢膜。
   其他染色法
   甲醇固定，瑞特氏或美藍染色呈兩極濃染的菌體。
   病原分離
（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶組織；對不新鮮或已被污染的樣品，可自骨髓中采取病料。采病料時用燒紅的刀片燒烙組織，而后用滅菌棉拭子或接種環通過燒烙表面插入組織或心血內取樣。如果為活禽，可通過鼻孔擠出粘液，或將棉拭子插入鼻裂中取樣。
（2）培養基制備：馬丁瓊脂培養基（本實驗中采用該培養基）、5％雞血清葡萄糖淀粉瓊脂、鮮血瓊脂培養基。
（3）動物接種：如果病料污染嚴重，則可將0.2mL碾碎的病料，經皮下或腹腔內接種家兔、小鼠或易感雞，接種動物在24h～48h內死亡，可以從肝臟、心血中分離到巴氏桿菌。
（4）培養：將病料接種于馬丁瓊脂培養基在35℃～37℃下培養，經18h～24h培養后菌落直徑為1mm～3mm，菌落呈散在、圓形，表面凸起呈奶滴狀。