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蛋白質的分離純化

時間:2015/6/2閱讀:498
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(一)根據配體特異性的分離方法-親和色譜法
ELISA試劑盒親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質/的一種極為有效的方法,它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很復雜的蛋白質混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結合。其基本原理:蛋白質在組織或細胞中是以復雜的混合物形式存在,每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質,因此蛋白質的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學中的重要的一部分,至今還沒的單獨或一套現成的方法能移把任何一種蛋白質從復雜的混合蛋白質中提取出來,因此往往采取幾種方法聯合使用。

(二)根據蛋白質分子大小的差別的分離方法
1、透析與超濾 
ELISA試劑盒透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開。
超濾法是利用高壓力或離心力,強使水和其他小的溶質分子通過半透膜,而蛋白質留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質。
2、凝膠過濾法 
也稱分子排阻層析或分子篩層析,ELISA試劑盒這是根據分子大小分離蛋白質混合物zui有效的方法之一。柱中zui常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。亞利桑那菌瓊脂(SA)      Salmonella Arizona Agar    100    用于亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離(SN標準)
亞碲酸鹽卵黃增菌液     Egg-Yolk lurite Emulsion    5ml*10    加入Baird-Parker瓊脂基礎中
亞碲酸鈉肉湯培養基基礎       Sodium lurite Broth Base    250    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養。每100ml培養基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
新生霉素A    Novobiocin    2mg/支*5    添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌
新生霉素    Novobiocin Sodium Salt    1.5mg/支*5    使用前,每支加入100mlHB4153中
心浸液瓊脂    Heart Infusion Agar    250    用于培養營養要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
現隱肉湯    Presence Absence Broth    250    用于水中大腸菌群計數(US-EPA方法)
細菌總數顯色培養基    Total Genes Chromogenic Medium     250g    用于快速、準確檢測細菌總數,培養24小時,細菌顯紅色
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂         Simmons Citrate Agar    250    用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(GB標準)
我妻氏培養基基礎         Wagstsuma Agar Base    250    用于神奈川現象試驗(SN標準)
衛矛醇半固體瓊脂        Dulcitol Semisolid Agar    10    生化培養基,用于細菌衛予醇發酵試驗(SN標準)
兔血漿      Rabbit  Plasma    0.5ml*20    用于金黃色葡萄球菌凝固酶試驗
四環素檢定瓊脂        Tetracyline Examination Agar    250    用于四環素殘留的微生物學檢定(SN標準)
四號瓊脂基礎          No.4 Agar Base    250    用于霍亂弧菌選擇性分離培養,滅菌冷至50℃加入亞碲酸鉀,倒平板
水平板計數瓊脂培養基    Water Plate Count Agar    250    用于飼料中細菌總數測定
嗜鹽菌選擇性瓊脂      Halophilic Bacteria Selective Agar    250    用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(GB標準)
山梨醇麥康凱瓊脂基礎(SMAC)       Sorbitol Maconkey Agar Base    250    用于大腸桿菌0157的分離培養(SN標準)

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