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其他檢測的特異性決定因素

時間:2021/4/2閱讀:479
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其他檢測操作流程:

菌株復蘇:(按三區劃線法將留菌管內的原始菌株進行復蘇)

1、所有菌株,顯色培養基分4區,每區一株,標明菌株號、菌種名常用縮寫如下:
cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 熱帶念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隱球菌,其他菌種標記全名

2、隱球菌除傳顯色培養基以外,另傳1/2塊血平皿上述菌株統一37oC孵育48h
菌種鑒定:(48h后觀察結果)

1、顯色培養結果:
cal:綠色 ctr:藍色 ckr:粉色 cgl:紫色

2、隱球菌在血平皿上為透明白色偏小的菌落
若不純或出現污染,傳半塊顯色/血平皿分純,37oC孵育48h。

其他檢測特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

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