變性總蛋白提取(SD-001)
以下步驟是從 15-20 mg 組織中提取,對于昆蟲組織,例如果蠅,使用 15-20 個幼蟲,蛹或成蟲樣本。如果起始量較大或者較小,需調整相應裂解液的用量比例。
1. 將離心管柱及接收管套管放在冰上預冷
2. 將 15-20 mg 組織放置于離心管柱上,用塑料棍扭轉研磨 50-60 次,加入 200ul 細胞裂解液,繼續研磨 30-60 次。(組織用量不要過量,無需過度研磨,裂解液可分兩次加入以得到最佳效果)注意:塑料研磨棒可以重復使用,用蒸餾水*沖洗干凈,用紙巾擦干。
3. 蓋上蓋子室溫孵育 1-2 分鐘,14000-16000rpm 離心 1-2 分鐘取出。
4. 立刻將收集管放置于冰上,棄去離心管柱,蛋白提取完成可應用于下游實驗。
請注意:部分未*裂解的組織不會影響樣品質量。
天然總蛋白提取(SN-002)
1. 將天然細胞裂解液(SN-002),離心管柱及接收管套管放在冰上預冷。
2. 將 15-20 mg 組織放置于離心管柱上,用塑料棍扭轉研磨 50-60 次,加入 200ul 天然細胞裂解液(SN-002),繼續研磨 30-60 次。(組織用量不要過量,無需過度研磨,裂解液可分兩次加入以得到最佳效果)。注意:塑料研磨棒可以重復使用,用蒸餾水*沖洗干凈,用紙巾擦干。
3. 開蓋冰上孵育 5 分鐘,蓋上蓋子,4℃,14000-16000rpm 離心 1-2 分鐘取出。
4. 立刻將收集管放置于冰上,棄去離心管柱,蛋白提取完成可應用于下游實驗。