(一)準確稱量試劑：根據不同的菌類和用途，選擇適宜的培養基，培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值：將稱量好的培養基各種成分放入容器內，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1NNaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝：將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100～150ml)，塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。
(五) 滅菌：培養基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。
