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1、 吸出培養板中的培養基，用yi蛋白酶消化細胞，然后加入適量的培養基將培養板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟。
2、 將細胞懸浮液收集到離心管中，在2-8℃下以1000×g離心5分鐘，然后吸去培養基，用預冷PBS洗滌細胞3次。
3、 加入適量的預冷PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。在6孔培養板（約1×106個細胞）中，每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞。
4、 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融，重復凍融過程數次，直至細胞*裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。
5、 2-8℃下以1500×g離心10分鐘，去除細胞碎片，收集上清液，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
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