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用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法（eg：ELISA雙抗體夾心法測定培養上清中IFN-γ水平）操作步驟：
1、包被：取空白 96 孔板，按 COA 用 PBS 稀釋捕獲抗體，每孔 100μl捕獲抗體工作液，室溫過夜；
2、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；
3、封閉：加入封閉液 200 μL/孔封閉 ELISA 板，室溫孵育 1h；
4、洗板：甩去板中的封閉液體，加入洗液 350μL/孔，洗板 3 次；
6、加樣：取出包被封閉好的 96 孔板，分別加入 100μl標準品或稀釋好的樣品，標準品做復孔，室溫孵育 2h；
7、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；
8、加酶標抗體：按 COA 用稀釋液稀釋檢測抗體，每孔 100μl檢測抗體工作液，室溫孵育 2h；
9、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；
10、加入底物：每孔 100μl顯色液，室溫避光孵育 20min，連續觀察顏色變化；
11、加終止液：每孔 50μl終止液，輕柔混勻；
12、讀板：檢測根據酶標儀器操作方法，上機檢測 OD值，通過計算獲得所測物質的濃度。
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