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化學發光技術
放射免疫分析法有很高的靈敏度,但存在著放射性防護和同位素污染等問題。近年來,許多非放射性同位素標記的免疫分析方法相繼出現。其中,在化學發光反應及抗原-抗體特異性識別基礎上建立起來的一種新的非放射免疫分析技術--化學發光免疫分析法,由于這種方法具有靈敏度高,特異性強,精密度好,線性范圍寬,儀器設備簡單,試劑價格低廉,方法穩定、快速等優點,已成為一種重要的非同位素標記免疫學檢測方法。
把化學發光物質與免疫學反應結合起來,用光反應表現被測的免疫成分濃度,即把高靈敏的光反應與特異性的免疫學反應相結合的方法,稱為化學發光免疫分析技術。
化學發光技術是將發光物質(如吖啶酯、魯米諾等)標記抗原或抗體進行反應,發光物質在反應劑(如過氧化陰離子)激發下生成激發態中間體,當激發態中間體回到穩定的基態時發射出光子,用自動發光分析儀接收光信號,測定光子產量,以反映待檢樣品中抗體或抗原含量。化學發光免疫分析方法的檢測靈敏度要遠遠高于ELISA、熒光免疫等,而優于或與同位素檢測相當;在使用方便性上,化學發光與傳統ELISA方法一樣簡單易用;在對人體和環境的危害上,化學發光對此沒有任何擔憂。
目前,越來越多的免疫檢測項目通過化學發光免疫檢測來進行,以代替傳統的ELISA和放射免疫分析法。
化學發光免疫分析包括三大類型:標記化學發光物質的化學發光免疫分析、標記熒光物質的熒光化學發光免疫分析和標記酶的化學發光酶聯免疫分析。
zui近的一些分子生物學進展使得一些生物技術工具極大提高了生物發光和化學發光的檢測和快速應用。生物發光和化學發光(BL/CL)的主要特點就在于發光信號的高度可測性,可以用PMT(光電倍增管)和CCD成像系統來檢測極少量的光子信號。BL是屬于CL范疇之內,CL反應的特點是高光子產生效率,BL為0.5~0.8,CL為0.1-0.001。因此BL/CL的檢測極限可以達到10-21~10-18mol,這顯然要比其他的光學技術強得多。BL/CL已經廣泛的應用到免疫檢測中進行標記物的超靈敏檢測。
CL免疫檢測不但可以通過以CL分子直接標記抗原或抗體,也可以以CL底物標記可被檢測的酶。相比同位素檢測,CL檢測以其更加靈敏和可檢測性獲得越來越多的應用。
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