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博湖試劑-巨細胞病毒抗體IgG(CMVAb-IgG)檢測

時間:2014/5/27閱讀:784
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巨細胞病毒抗體IgG(CMVAb-IgG)檢測
 
    [測定方法]  ELISA法
    [方法學原理]  在微孔表面包被純化的巨細胞病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細胞病毒抗體-IgG可與微孔上抗原相結合。然后洗去未結合物質,再加入酶聯液,與抗原抗體復合物結合。洗去過量的酶聯液。zui后加入底物和色原(顯色液)。在特定時間終止酶聯液的催化反應。所產生的顏色強度與標本中巨細胞病毒抗體-IgG含量呈正相關。通過酶標儀與校正和對照相比,讀出結果。
    [標本準備]  靜脈抽血2ml,不抗凝。
    [試劑]
    1.微孔板
    2.樣品稀釋液
    3.HRP-抗人IgG酶結合物
    4.陰性對照
    5.陽性對照
    6.洗滌劑
    7.TMB顯色液
    8.終止液
    [儀器設備]  酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
    [測定步驟]
    1.吸取5u1血清標本加入250gl標本稀釋液中,做1:51稀釋。
    2。吸取l00ull稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液(不稀釋),加人微孔板內,設空白對照l孔。振蕩,混勻,去除孔內液體中氣泡,室溫環境中孵育20min。
    3,棄去孔內液體,用洗滌液洗5次。
    4。每孔再加入100gl酶聯結合物,室溫環境中孵育20min。
    5。棄去孔中酶聯液,用洗滌液洗5次。
    6,每孔加入100ul TMB顯色液,室溫環境中孵育10min。
    ?。每孔加入100ul終止液,終止反應,充分混勻。
    8。用酶標儀(波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
    [注意事項]
    1.整個檢測過程應符合實驗室質量手冊和生物安全守則規定,嚴防交叉污染。
    2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    3.試劑應保存于2~8℃冰箱,使用前應在室溫環境中平衡30min。
    4.洗滌時各孔均應加滿洗滌液,防止孔內有游離酶未洗凈,每次洗板后均應在吸水紙上拍干。
    5.血標本應分離出血清保存,2~8℃可保存?d,冷凍保存可至6個月,避免反復凍融。
    6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、曝曬或強光。   
 

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