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博湖試劑-純化抗體的定性和定量

時間:2014/6/5閱讀:626
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純化抗體的定性和定量
 
    在純化抗體時需要控制好幾個指標,包括純度,含量及抗體的抗原結合活性。
 
    純度  在實驗的任何階段,確定抗體溶液純度的zui簡單方法是取一部分樣本進行SDS-PAGE電泳。凝膠可用考馬斯亮藍染色(靈敏度為0.1—0.5ug/帶)或銀染(靈敏度1~l0ug/帶)。
 
    定量  如果抗體還不純,有一個快捷的定量方法,即通過SDS-PAGE電泳分離出輕、重鏈,然后和已知的標準染色帶比較。如果需要分析許多樣本,用免疫測定法對抗體定量較容易。如果抗體是經過純化的,可通過測蛋白總量代替上述兩種方法,包括附錄Ⅱ所述的方法。有一簡單的方法,即紫外吸收法。抗體的量可通過測280nm處的吸收值來測(10D大致相當于0.75mg/m1的純化抗體)。
 
    抗原結合活性  一般說來,用本書建議使用的純化方法不會引起抗原結合活性的改變。用蛋白G或蛋白A樹脂很少導致抗體活性喪失。然而,如果終抗體產物的作用不如原來所預料的好,檢測抗體純化過程所丟失的活性就極為重要。用一系列滴定法比較純化的抗體和其原材料的活性,以標定每一步中的總抗體量,這將有助于較好的估計通過純化所丟失的活性。

 Anti-CA125 (Ovarian cancer antigen)  卵巢癌抗原抗體 
 Anti-CA15-3  乳腺癌相關抗原抗體
 Anti-CAD/CPAN(Caspase-Activated Deoxyribonuclease)  Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體
 Anti-Casein(bovine)  抗牛酪蛋白抗體
 Anti-Calcineurin α /PP-2B alpha 1  蛋白磷酸酯酶-2B催化亞單位抗體
 Anti-caldesmon  鈣介質素抗體
 Anti-Calpain 1  鈣蛋白酶抗體
 Anti-Calpain 2 (Calcium activated neutral proteinase 2)  鈣激活的中性蛋白酶2抗體
 Anti-CNN1(Calponin 1)  鈣調節蛋白-1抗體
 Anti-CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha)  鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體
 Anti-phospho-CaMK2a(pThr286)  磷酸化鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體
 Anti-Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG)  鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 
 Anti-CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita)  鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2b抗體

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