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產品名稱 | 英文名稱 | 規格 |
P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)規格 | P388D1 (mouse lymphoid tumor cells) | 5×106cells |
產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。?
細胞培養技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。
凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養的操作,收集培養好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
DR-S1家兔皮膚細胞1ml/T75
BFR-S3大額牛皮膚細胞1ml/T75
BTA-S2黃牛皮膚細胞1ml/T75
BIN-S1瘤牛皮膚細胞1ml/T75
BMU-S1耗牛皮膚細胞1ml/T75
BOS-1大額牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
BOS-2大額牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
BOS-3婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
BOS-4婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
WB-S1水牛牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
WB-S2水牛牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
WB-S3水牛牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
WB-S4水牛牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
WB-S5水牛牛皮膚成纖維樣細胞1ml/T75
P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)規格Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/RBITC 羅丹明標記的兔抗人IgG F(ab')2 規格: 0.1mlPhospho-MAPKAPK2(Thr334) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體 規格: 0.1ml
PHGDH 磷酸甘油酸脫酶抗體 0.2mlphospho-GABBR2 (Ser892) 磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體 規格: 0.1ml
CCL12/MCP5 單核細胞趨化蛋白5抗體 規格: 0.2mlWNK3 protein 絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3抗體 規格: 0.1ml
NLRP10 富含亮氨酸重復結構域蛋白10抗體 規格: 0.2mlRNF170 環指蛋白170抗體 規格: 0.2ml
phospho-Histone H1.4(Thr18) 磷酸化組蛋白H1.4抗體 規格: 0.1mlPlastin L 淋巴細胞胞漿蛋白LCP1抗體 規格: 0.2ml
Cyclin A1 周期素A1蛋白抗體 規格: 0.2mlphospho-FANCD2(Ser222) 磷酸化FANCD2抗體 規格: 0.1ml
TM7SF2/DHCR14A 脫膽固醇還原酶14抗體 規格: 0.2mlPKA R2/PKA IIα 蛋白激酶A受體2α亞基抗體 規格: 0.2ml
SHFM3 SHFM3蛋白抗體 規格: 0.2mlKCNG4/KV6.3 鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體 規格: 0.2ml
phospho-MAP4(Ser941) 磷酸化微管相關蛋白4抗體 規格: 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗狗IgG 規格: 0.1ml
NAT10 乙酰基轉移酶10抗體 規格: 0.2mlphospho-Alpha synuclein(Ser129) 磷酸化核突觸蛋白α抗體 規格: 0.1ml
Phospho-LKB1(Thr189) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體 規格: 0.1mlRabbit anti-Goat IgG whole serum 兔抗羊IgG抗清 規格: 1ml
bFGFR/FGFR1 堿性成纖維細胞生因子受體1抗體 規格: 0.1mlPancreatic Amylase 胰淀粉酶抗體 規格: 0.1ml
IL5RA/CD125 白介素-5受體α鏈抗體IL-5Rα 規格: 0.1mlphospho-MEF2C(Ser387) 磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規格: 0.1ml
HHEX/HMPH 同源盒蛋白PRH抗體 規格: 0.1mlGDF15/MIC-1 生分化因子15/巨嗜細胞抑制因子1抗體 規格: 0.1ml
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