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當(dāng)前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T血紅鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號50T
品 牌
廠商性質(zhì)其他
所 在 地上海市
更新時間:2020-04-12 13:09:42瀏覽次數(shù):633次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)產(chǎn)品特點:
1. 血紅鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Streptococcus sanguinis ? |
貨號 | BJ-R7233 |
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
2-硝-3-甲氧吡分子式:154.12英文名稱:2- nitro -3- a:20265-37-6分子量: C6H6N2O3
3-甲氧吡分子式:109.13英文名稱:3- methyl group:7295-76-3分子量: C6H7NO
1,3,5-*分子式:120.19英文名稱:1,3,5- three toluene:108-67-8分子量: C9H12; C6H3(CH3)3
新綠原英文名稱:Neochlorogenic acid分子式:354.31分子量:C16H18O9:906-33-2
硝酸鋁分子式:213英文名稱:Aluminium nitrate:13473-90-0分子量: AlN3O9
三聚乙醛英文名稱:Melamine分子式:132.16分子量: C6H12O3:123-63-7
3-酰甲溴分子式:英文名稱:3- cyano phenacyl bromide:50916-55-7分子量:
偶氮分子式:182.22英文名稱:Aminoazobenzene:103-33-3分子量: C12H10N2
朝藿定B英文名稱:Epidemin B分子式:808.77632分子量:C38H48O19:110623-73-9
2,4-二羥喹啉分子式:161.16英文名稱:2,4- two hydroxy group:86-95-3分子量: C9H7NO2
無水硫酸錳分子式:151英文名稱:Anhydrous manganese sulfate:7785-87-7分子量: MnO4S
血紅鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒猴菌豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum
鼠李糖發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養(yǎng)基
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeBIU-87(人膀胱細胞)
小鼠淋巴管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
葡萄糖激酶(GCK)重組蛋白英文名稱:Recombinant Glucokinase (GCK)
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. Lactis人胰島β細胞*培養(yǎng)基
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum枝芽胞菌 Virgibacillus sp.
大鼠星形膠質(zhì)細胞英文名稱:Rat Astrocytes
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞*培養(yǎng)基C2C12(小鼠成肌細胞)
茜素-β-半糖苷瓊脂/Aliz-Gal Agar用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測和計數(shù)250克國產(chǎn)/進口
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