實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點：
1. 豬痢疾短螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

細胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-1）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 冰凍切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

化妝品糖精（saccharin）含量紫外光譜法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血逆轉(zhuǎn)錄酶（REVERSE TRANSCREPTASE）活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 石蠟切片組織線粒體復(fù)合物IV蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

冰凍切片脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

細胞冠狀病毒3C類蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

組織賴氨酸（lysine）含量熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織AURORA-C激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細胞線粒體復(fù)合物II蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

血亮氨酸（leucine含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

豬痢疾短螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒鈷試劑英文名稱：Cobalt reagent分子式：173.17分子量： C10H7NO2：131-91-9

8-溴-2-氯喹啉分子式：242.4997英文名稱：8- -2- chloride：163485-86-7分子量： C9H5BrClN

二甲酚藍英文名稱：Xylene phenol blue分子式：410.48分子量： C23H22O5S：125-31-5

引杜林(水溶)英文名稱：Lead Dulin (Shui Rong)分子式：分子量：：8004-99-7

1,3-雙[4-(3-氧)甲酰]分子式：500.54英文名稱：1,3- bis [4- (3- amino group) of benzene：110471-15-3分子量： C32H24N2O4

鄰二甲英文名稱：Two formic acid分子式：166.13分子量： C8H6O4：88-99-3

硫酸鈦分子式：240.02英文名稱：Titanium sulfate：18130-44-4分子量： Ti（SO4）2

桔皮素英文名稱：HESPERITIN分子式：372.37分子量：C20H20O7：481-53-8

3-(2-氨乙)吡分子式：283.99英文名稱：3- (2- An Yiji) pyridine：307496-23-7分子量： C7H10N22HBr

3-溴-2-硝吡分子式：202.99英文名稱：3- -2- nitro pyridine：54231-33-3分子量： C5H3BrN2O2

2,5-二氟氯分子式：148.54英文名稱：2,5- two：2367-91-1分子量： C6H3ClF2