操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：EZH2抑制劑(EI1)

英文名稱：EI1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7841

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Khasianine

英文別名：   o-α-L-rhamnopyranosyl-(1 → 4 glu)-O-(3)-β-D-glucopyranosyl solasadine

CAS登錄號(hào)：   32449-98-2

分子式：   C39H63NO10

分子量：   705.92

銀椴苷

英文名：   Tiliroside

英文別名：   1-O-[5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-4H-1-benzopyran-3-yl]-β-D-glucopyranose 6-[3-(4-hydroxyphenyl)propenoate];2-(4-Hydroxyphenyl)-3-[6-O-[3-(4-hydroxyphenyl)acryloyl]-β-D-glucopyranosyloxy]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   20316-62-5

分子式：   C30H26O13

夏佛塔苷

英文名：   Schaftoside

英文別名：   8-(α-L-Arabinopyranosyl)-6-(β-D-glucopyranosyl)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   51938-32-0

分子式：   C26H28O14

女貞苷

英文名：   Ligustroflavone

英文別名：   7-[(O-6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl-(1->2)-O-[6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl-(1->6)]-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)- 4H-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   260413-62-5

分子式：   C33H40O18

大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷

英文名：   Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   113443-70-2

分子式：   C21H18O11

分子量：   446.36

L-茶氨酸

英文名：   L-Theanine

英文別名：   L-GLUTAMIC ACID GAMMA-(ETHYLAMIDE)

CAS登錄號(hào)：   3081-61-6

分子式：   C7H14N2O3

喹乙醇

英文名：   Olaquindox

英文別名：   2-(n-(2-hydroxyethyl)karbamoyl)-3-methylchinoxalin-1,4-dioxid

CAS登錄號(hào)：   23696-28-8

分子式：   C12H13N3O4

去亞甲基小檗堿

英文別名：   Dibenzo[a,g]quinolizinium,5,6-dihydro-2,3-dihydroxy-9,10-dimethoxy

CAS登錄號(hào)：   25459-91-0

分子式：   C19H18NO4

分子量：   324.35

歐夾竹桃苷

英文名：   Oleandrin

英文別名：   (3-beta,5-beta,16-beta)-hexopyranosyl)oxy)-14-hydroxy

CAS登錄號(hào)：   465-16-7

分子式：   C32H48O9

小檗紅堿

英文別名：   9-Berberoline

CAS登錄號(hào)：   15401-69-1

分子式：   C19H15NO4

分子量：   321.33

脫氫紫堇堿

英文名：   Dehydrocorydaline

英文別名：   13-Methyl-2,3,9,10-tetramethoxy-5,6-dihydrodibenzo[a,g]quinolizinium

CAS登錄號(hào)：   30045-16-0

分子式：   C22H24NO4

EZH2抑制劑(EI1)PKH67/PI雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒  500T  1瓶 L615細(xì)胞株 L615 低溫運(yùn)輸和保存

CFSE/PI雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒  500T  采樣產(chǎn)品系列  

PKH67細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒  500T  10mg 中性親和素蛋白 Nuetral Avidin -20℃保存

PKH26細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒  500T  250mL Sodium Chloride Solution（氯化鈉溶液），5M  Sodium Chloride Solution，5M  常溫保存

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-CCK8  250T|500T|1000T  25U 堿性，大腸桿菌 Alkaline Phosphatase，E.coli -20℃保存

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue  250T|500T|1000T  2 ug pSFV1 pSFV1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

酵母活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue  250T|500T|1000T  50次 柱式真菌RNAout Column Fungal RNAOUT 4℃保存

CFSE細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒  500T  2 ug pCL1 pCL1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒-綠色熒光  500T|1000T  菌種培養(yǎng)基 Strain Medium(for B.Cereus) 250g

CCK-8反應(yīng)終止液  500T|1000T  25g 橙黃G鈉 Orange G 室溫保存

細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒  20T|50T|100T  50T 犬瘟熱病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存