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EGFR/HER2雙重抑制劑(Pyrotinib)

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廠商性質其他

所  在  地上海市

更新時間:2022-06-20 15:56:57瀏覽次數:578次

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貨號 BJ-01X8549
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中文名稱:EGFR/HER2雙重抑制劑(Pyrotinib)

英文名稱:Pyrotinib

產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg

產品貨號:BJ-01X8549

Pyrotinib(SHR-1258)是有效和選擇性的EGFR/HER2雙重抑制劑,IC50值分別為13和38nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

:1269662-73-8

別名:SHR-1258

純度:98.40%

分子量:583.08

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

細胞培養操作規程:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備F-12K培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。


QQ截圖20220509112004.png

細胞培養方法:

1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;

⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。

3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

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EGFR/HER2雙重抑制劑(Pyrotinib)ERAB/HSD17B10  內質網Aβ相關結合蛋白抗體 規格: 0.1mlBrain protein CG6  腦蛋白CG6抗體 規格: 0.2ml

GFOD2  葡萄糖果糖還原2抗體 規格: 0.2ml

EGR3  早期生反應蛋白3抗體 規格: 0.1mlDVL2  蓬亂蛋白2抗體 規格: 0.2ml

phospho-EGFR (Tyr1016)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規格: 0.1ml

DISC1(NT)  DISC1 N端抗體 規格: 0.2mlADAMTSL2  整合素樣金屬蛋白與凝樣2蛋白抗體 規格: 0.2ml

Sulfatase 1  硫酸酯1抗體 規格: 0.2ml

Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1798)  磷酸化結節性硬化蛋白抗體 規格: 0.1mlPPAR gamma  過氧化活化增生受體γ抗體 規格: 0.2ml

Myt1  髓鞘轉錄因子1抗體 規格: 0.2ml

BRD1  BRD1蛋白抗體 規格: 0.2mlTRPV4/TRP12  瞬時受體電位蛋白12抗體 規格: 0.2ml

Destrin 19/ADF  肌動蛋白解聚因子19抗體 規格: 0.1ml

eIF4G  真核翻譯起始因子4G抗體 規格: 0.1mlNIK/MAPKKK14  NFkB誘導激抗體 規格: 0.1ml

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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