細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

中文名稱：Bcr-Abl抑制劑(DCC-2036)

英文名稱：DCC-2036

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產品貨號：BJ-01X8063

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

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人 PABPC1 基因全長ORF克隆人-1(CYC1)免疫試劑盒進口、分裝

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人 PM20D1 基因全長ORF克隆人細胞膜DNA抗體(cmDNA)免疫試劑盒進口、組裝

人 LIPH 基因全長ORF克隆人細胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒進口、分裝

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人 SEPP1 基因全長ORF克隆人細胞角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒進口、組裝

Bcr-Abl抑制劑(DCC-2036)TSHR反激動劑（ML224）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  ML22425g L- 天門冬 L-Aspartic Acid 室溫保存

GnRH激動劑(Alarelin Acetate)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Alarelin Acetate25mL Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X 常溫保存

GnRH受體激動劑（Leuprolide Acetate）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Leuprolide Acetate10g 考馬斯亮藍G-250 Coomassie Blue G-250  常溫保存

多巴胺D2亞類受體激動劑(Cabergoline)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Cabergoline2 ug pTrcHis C pTrcHis C 低溫運輸，-20℃保存

PPAR激活劑(Daidzein)  1mL(10mM)|500mg|1g|5g  Daidzein50次 磁珠動物DNAout MAG Animal DNAOUT 磁珠4℃保存，蛋白K溶液-20℃保存（勿反復凍融）

RIP2Kinase抑制劑(GSK583)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  GSK5832 ug pEGM-11ZF(+) pEGM-11ZF(+) 低溫運輸，-20℃保存

TRα和Trβ激動劑  1mL(10mM)|100mg|500mg  3,3,5-Triiodo-L-thyronine sodium小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗培養基  

TR alpha/TR beta激動劑  1mL(10mM)|100mg|500mg  3,3,5-Triiodo-L-thyronine1g 亞精胺 ( 精脒 )  4℃保存

TGR5激動劑(INT-777)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  INT-77750T 魚特定基因序列PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存

腺苷酸環化酶激活劑(Forskolin)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg  Forskolin100mL 淋巴細胞分離液A型（人） Lymphocyte Separation Solution A 4℃保存

鈣離子釋抑制劑(DHBP dibromide)  1mL(10mM)|100mg  DHBP dibromide250mL HEPES Lysis Buffer with NP-40  HEPES Lysis Buffer with NP-40  常溫保存