產品參數：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

小鼠 HMGB1 基因全長ORF克隆雞B因子(BF)免疫試劑盒現貨供應

小鼠 PDGFD 基因全長ORF克隆雞5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)免疫試劑盒*直銷

小鼠 FGF15 基因全長ORF克隆雞5核苷酸(5-NT)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠 PLAT 基因全長ORF克隆雞Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠 CCDC80 基因全長ORF克隆雞Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)免疫試劑盒現貨供應

小鼠 PLK4 / SAK 基因全長ORF克隆雞17-酮類固醇(17-KS)免疫試劑盒*直銷

小鼠 PIK3R4 基因全長ORF克隆雞17羥皮質類固醇(17-OHCS)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠 STK25 基因全長ORF克隆雞13,14二氫15-酮前列腺素F2α(PGFM)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠 CD55 基因全長ORF克隆雞1,4,5-三肌醇(IP3)免疫試劑盒現貨供應

小鼠 CCR3 基因全長ORF克隆雞1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD glucosidase)免疫試劑盒*直銷

小鼠 GFRA3 基因全長ORF克隆猴組胺(HIS)免疫試劑盒進口、分裝

Akt抑制劑（GSK2110183 hydrochloride）組織酮體定性檢測試劑盒(辛酸鉀法)  50T  50次 p19 miRNA 檢測試劑盒  p19 miRNA Detection Kit -20℃保存

尿酮體定性檢測試劑盒(Lange法)  50T  250mL NP40 Permeating Solution in PBS,10X（NP40滲透液，10X） NP40 Permeating Solution in PBS,10X 常溫保存

尿酮體定性檢測試劑盒(酮粉劑法)  100g  50 T 抑制與產生超氧陰離子自由基測試盒（比色法） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu微板法)  100T  2 ug pMSCV-PIG pMSCV-PIG 低溫運輸，-20℃保存

葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu比色法)  50T  瓊脂粉 Agar Powder 250g

總鐵結合力(TIBC)檢測試劑盒(亞鐵嗪微板法)  100T  1瓶 SW1990細胞株 SW1990 低溫運輸和保存

總鐵結合力(TIBC)檢測試劑盒(亞鐵嗪比色法)  50T  V-P半固體瓊脂 Voges-Proskauer Semisolid Agar 250g

鐵檢測試劑盒(亞鐵嗪比色法)  50T  10g 伊紅 Y 二鈉鹽，水溶性 Eosin Y Disodium Salt 室溫陰涼干燥保存

無機磷檢測試劑盒(紫外分光光度微板法)  100T  50T 非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存

無機磷檢測試劑盒(紫外分光光度比色法)  100T  250mL 麗春紅S染膜液 Ponceau S BlotStain 避光保存

無機磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍比色法)  100T  2 ug SB-T11 SB-T11 低溫運輸，-20℃保存