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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞試劑>>抑制劑激活劑>> TGN抑制劑(STF-62247)
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產(chǎn)品型號(hào)
品 牌
廠商性質(zhì)其他
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2022-06-20 13:32:48瀏覽次數(shù):517次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 智慧城市網(wǎng)貨號(hào) | BJ-01X8482 |
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品參數(shù):
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
TGN抑制劑(STF-62247) | STF-62247 | 1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg | BJ-01X8482 |
商品詳細(xì)介紹:
STF-62247是一個(gè)TGN抑制劑,在RCC4和RCC4/VHL細(xì)胞中的IC50分別是0.625μM和16μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :315702-99-9 別名:STF62247;STF 62247 純度:98.09% 分子量:267.35 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
食蟹猴 TLR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆腫瘤干細(xì)胞熒光定性檢測(cè)試劑盒 20次
食蟹猴 TLR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 5次
食蟹猴 TFRC 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物肝細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 5次
食蟹猴 ABCG2 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物新生心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 5次
食蟹猴 CD274 / B7-H1 / PD-L1 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物脂肪組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 BTLA 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物腎上腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 PDCD1LG2 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物骨組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 CD247 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物腦組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 LAMP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物軟骨組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 CD226 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物直腸組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
食蟹猴 PRNP 基因全長(zhǎng)ORF克隆動(dòng)物內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 10次
TGN抑制劑(STF-62247)250mL PBlec Washing Solution in PBS,pH7.4,2X PBlec Washing Solution in PBS,pH7.4,2X 常溫保存
3g 蛋白去除試劑S Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
2 ug pNEBRX1-hygro pNEBRX1-hygro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
WPM培養(yǎng)基 WPM Medium 250g
1瓶 TE-1細(xì)胞株 TE-1 低溫運(yùn)輸和保存
培養(yǎng)基(蛋白胨水) Indole Medium 10g
50mg 異硫酸熒光素 FITC 4℃保存
50T 軍團(tuán)菌16S rRNA基因(386bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100mL 沉淀型TMB顯色試劑盒 Precipitated TMB Chromogenic Kit 4℃避光保存
2 ug STAT3-TA-lucifer STAT3-TA-lucifer 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5mL PMSF 溶液,10mg/mL PMSF Solution -20℃保存
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