培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產品參數：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

人 USF1 基因全長ORF克隆小鼠內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)免疫試劑盒進口、分裝

人 AQP9 基因全長ORF克隆小鼠內皮脂肪(EL)免疫試劑盒現貨供應

人 EEF1D 基因全長ORF克隆小鼠內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)免疫試劑盒*直銷

人 ING2 基因全長ORF克隆小鼠內皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒進口、組裝

人 PSMA3 基因全長ORF克隆小鼠內皮素1(ET-1)免疫試劑盒進口、分裝

人 EMG1 基因全長ORF克隆小鼠內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)免疫試劑盒現貨供應

人 MYF6 基因全長ORF克隆小鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒*直銷

人 TGIF2 基因全長ORF克隆小鼠膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒進口、組裝

人 RGS18 基因全長ORF克隆小鼠繆勒管抑制物質/抗繆勒管激素(AMH)免疫試劑盒進口、分裝

人 IDI2 基因全長ORF克隆小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)免疫試劑盒現貨供應

人 CLRN3 基因全長ORF克隆小鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒*直銷

Btk抑制劑(ONO-4059 analog)脯氨酰羥化酶-2抑制劑(PHD2抑制劑)(IOX2)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  IOX2PH6.8鹽緩沖液  500ml*20瓶

DNA合成抑制劑(Triciribine)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Triciribine5000U 微球菌核酸 Micrococcal Nuclease  -20℃保存

VEGF和FGF受體抑制劑(E-3810)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  E-3810250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.0   Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.0   常溫保存

Notch抑制劑(LY3039478)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  LY303947810mL G鈉鹽溶液 Penicillin G Sodium Solution -20 ℃避光保存

BRAF抑制劑(PLX7904)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  PLX79042 ug pQCXIN pQCXIN 低溫運輸，-20℃保存

TMEM16A chloride通道抑制劑(Shikonin)  1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg|100mg  Shikonin無鹽胰胨水  20支

廣譜Aurora激酶抑制劑(AMG 900)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  AMG 9002 ug pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-copGFP 低溫運輸，-20℃保存

ERK抑制劑(VX-11e)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  VX-11e（100IU）和亞碲酸鉀（1mg）混合液  1ml*5支/盒

UCHL5和Usp14活性抑制劑(b-AP15)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  b-AP1525g L- 蘋果酸 L(-)-Malic Acid 室溫陰涼干燥保存

FGFR4抑制劑(BLU9931)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  BLU9931亞利桑那菌瓊脂（SA） Salmonella Arizona Agar 100

VEGFR2抑制劑(XL184)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg  Cabozantinib S-malate5mL 角膜上皮細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存