詳細(xì)介紹
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)人burkitt淋巴瘤細(xì)胞;CA46培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司常期代理ATCC
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產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 人burkitt淋巴瘤細(xì)胞;CA46培養(yǎng)
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性該細(xì)胞源自Burkitt's淋巴瘤患者的B淋巴細(xì)胞,EBNA、Fc陰性。
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)20%FBS
傳代方法細(xì)胞密度在2~3×105cells/ml,飽和密度為2×106,每周換液2~3次
傳代情況C2
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)培養(yǎng)法(-)
STRAmelogenin:X;CSF1PO:10,12;D13S317:8,12;D16S539:11,12;D18S51:13,16;D19S433:15.2;D21S11:28,29;D2S1338:20,22;D3S1358:16,18;D5S818:13;D7S820:11,12;D8S1179:15;FGA:19,23;TH01:7,9;TPOX:8,9;vWA:15,16;
同工酶
染色體46,XO,XY
注意事項(xiàng):
?1.一般客戶拿到人burkitt淋巴瘤細(xì)胞;CA46培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
CD8*犬白細(xì)胞分化抗原8規(guī)格48T/96T
CD6*犬白細(xì)胞分化抗原6規(guī)格48T/96T
IL-6*犬白介素6規(guī)格48T/96T
IL-4*犬白介素4規(guī)格48T/96T
IL-2*犬白介素2規(guī)格48T/96T
IL-18*犬白介素18規(guī)格48T/96T
IFN-γ*犬γ干擾素規(guī)格48T/96T
GABA*犬γ氨基丁酸規(guī)格48T/96T
β-EP*犬β內(nèi)啡肽規(guī)格48T/96T
IFN-α*犬α干擾素規(guī)格48T/96T
人burkitt淋巴瘤細(xì)胞;CA46培養(yǎng)*Anti-CREB-1環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體規(guī)格:0.1ml
*Anti-phospho-CREB-1(Ser133)磷酸化CREB-1抗體規(guī)格:0.1ml
*Anti-CRF/CRH促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子抗體規(guī)格:0.1ml
*Anti-CRF/CRH促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子抗體規(guī)格:0.1ml
*Anti-CRHR1/CRFR1促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體1抗體規(guī)格:0.2ml
*Anti-CRHR2/CRFR2促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體2抗體規(guī)格:0.2ml
*Anti-CSIG細(xì)胞衰老抑制基因抗體規(guī)格:0.2ml
*Anti-Cripto-1(NT)畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子抗體(N端)規(guī)格:0.2ml
*Anti-Cripto-1畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子抗體(C端)規(guī)格:0.2ml
*Anti-CSMD1CSMD1抗體規(guī)格:0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法:
人burkitt淋巴瘤細(xì)胞;CA46培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。