詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]培養(yǎng)
形態(tài)特性圓
生長特性懸浮生長;部分細(xì)胞貼壁生長
特征特性該細(xì)胞表達(dá)補(bǔ)體C3受體(C3R),產(chǎn)生溶菌酶、粒細(xì)胞集落刺激活性(CSA)、IL-3。4ng/mlLPS可以抑制WEHI-3的生長,更高濃度可以阻斷其生長;30~40μg/ml右旋葡聚糖也可抑制其生長;可以吞噬乳膠顆粒,但無毒性;可吞噬酵母聚糖和BCG,并阻斷該細(xì)胞的生長;該細(xì)胞僅表現(xiàn)出微弱的抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)。鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法細(xì)胞密度維持在2×105~2×106/ml,每2~3天換液1次。
傳代情況C5
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR-
同工酶
染色體70~78
冷凍保存細(xì)胞之方法:
小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
*Anti-Nebulin/FITC熒光素標(biāo)記伴肌動蛋白抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-NEP/FITC熒光素標(biāo)記腦啡肽酶抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-NephrinProtein/FITC熒光素標(biāo)記去氧腎上腺素抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-EphrinB/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠EphrinB抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-EphrinB(phosphoTyr331)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化EphrinB抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-EphrinB(phosphoTyr298)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化EphrinB抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-EphrinB(phosphoTyr324/329)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化EphrinB抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-EphrinB(phosphoTyr317)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化EphrinB抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Nestin/FITC熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Nesfatin-1/Nucb2/FITC熒光素標(biāo)記新的飽食分子蛋白抗體IgG規(guī)格:0.2ml
小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]培養(yǎng)*Anti-dUTPase/FITC熒光素標(biāo)記抗脫氧尿嘧啶三磷酸核苷水解酶抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-DVL1/FITC熒光素標(biāo)記蓬亂蛋白1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-DVH/FITC熒光素標(biāo)記鴨病毒性肝炎抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-FLAGTag(NT)/FITC熒光素標(biāo)記抗標(biāo)簽FLAGTag標(biāo)簽抗體(N端)IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-K3/FITC熒光素標(biāo)記抗K3蛋白抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-FLAGTag(CT)/FITC熒光素標(biāo)記FLAGTag標(biāo)簽抗體(C端)IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-FLAGTag(CT)/HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記FLAGTag標(biāo)簽抗體(C端)IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-FLAGTag(CT)/FITC熒光素標(biāo)記FLAGTag標(biāo)簽抗體(C端)IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-FLAGTag(CT)/HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記FLAGTag標(biāo)簽抗體(C端)IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Dynamin2/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人鳥苷三磷酸酶-發(fā)動蛋白2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
注意事項(xiàng):
?1.一般客戶拿到小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。