詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法:
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422說明書
形態(tài)特性實(shí)體瘤
生長特性體內(nèi)生長
特征特性1964年建株;甲基膽蒽植入Km小鼠腦內(nèi)誘發(fā)星
細(xì)胞瘤,傳至第120代后轉(zhuǎn)為膠質(zhì)細(xì)胞瘤;瘤細(xì)胞懸液同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植,成功率皆100%。肌肉及腦內(nèi)移植可
成較規(guī)律的移植性瘤株,存活時間腦內(nèi)型15.9±4.8天;肌肉型20.3±6.6天。
培養(yǎng)條件-
傳代方法制備成細(xì)胞懸液接種至Km等小鼠。
傳代情況不詳
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR-
同工酶
染色體-
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422說明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
?1.一般客戶拿到KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422說明書后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
*Anti-Socs1/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Socs2/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Socs3/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-SOD1/FITC熒光素標(biāo)記超氧化物歧化酶1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-SOD2/FITC熒光素超氧化物歧化酶2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Solutecarrierfamily1/FITC熒光素標(biāo)記溶質(zhì)攜帶物家族-1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Somatostatin/GRIH/FITC熒光素標(biāo)記生長抑素抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-GRIM19/FITC熒光素標(biāo)記干擾素/維甲酸誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Sox2/FITC熒光素標(biāo)記胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-SP/FITC熒光素標(biāo)記P物質(zhì)抗體IgG規(guī)格:0.2ml
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422說明書*Anti-IL-13Ra2/FITC熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-13受體a2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-14/Taxilinalpha/FITC熒光素標(biāo)記抗白介素14抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-15/FITC熒光素標(biāo)記白介素15抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-15RAlpha/FITC熒光素標(biāo)記白介素15受體α抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-16/FITC熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-16抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-16/FITC熒光素標(biāo)記白介素16抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-17/FITC熒光素FITC標(biāo)記白介素-17抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-17B/FITC熒光素標(biāo)記白介素-17B抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-17/PE熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC熒光素標(biāo)記白介素17受體抗體IgG規(guī)格:0.2ml
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