詳細介紹
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產品描述:
細胞名稱 小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499說明書
形態(tài)特性淋巴母細胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法保持細胞密度在1×105~1×106cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR-
同工酶
染色體
注意事項:
?1.一般客戶拿到小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499說明書后,應該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā);
(6)細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
CD24 Others Rat 大鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 人細胞裂解液 (陽性對照)
人少突膠質前體細胞總RNAHOPC NA
胎兒表皮角化細胞*培養(yǎng)基 100mL
MDCK細胞,狗腎細胞 AAV-293( 胚腎細胞) 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B5
EFNB2A Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (Fc 標簽)
WI-38(人胚肺細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠癌細胞;CCC-Ca761-03
小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499說明書*Anti-Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2(Thr402)/FITC熒光素標記磷酸化p21激活激酶1/2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PAK2/FITC熒光素標記p21激活激酶2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Phospho-PAK2(Ser20)/FITC熒光素標記磷酸化p21激活激酶2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PAK4/FITC熒光素標記p21激活激酶4抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560)/FITC熒光素標記磷酸化p21激活激酶4、5、6抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PAK7/PAK5/MBT/FITC熒光素標記抗激活激酶PAK7/PAK5抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti--phospho-P70S6Kinasebeta(Thr228)/FITC熒光素標記抗磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-Phospho-p70S6KinaseBeta(Thr421/Ser424)/FITC熒光素標記磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-phospho-P70S6Kinasebeta(Ser371)/FITC熒光素標記磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-phospho-STAT1(pThr701)/FITC熒光素標記抗磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
冷凍保存細胞之方法:
小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。