詳細(xì)介紹
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)雜交瘤細(xì)胞;WXR培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞;WXR培養(yǎng)
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況C5
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
注意事項:
?1.一般客戶拿到雜交瘤細(xì)胞;WXR培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
LPM添加劑每支添加于200mlHB4189中
N6培養(yǎng)基 N6 Medium 用于植物組織培養(yǎng)
動力吲哚鳥氨酸培養(yǎng)基 MIO Medium 250克 動力、吲哚和鳥氨酸試驗
選擇性APS超級肉湯基礎(chǔ)250g/瓶非動物源配方,用于培養(yǎng)重組大腸桿菌菌株,提高質(zhì)粒產(chǎn)量incubationmedia選擇性APS超級肉湯基礎(chǔ)250g/瓶非動物源配方,用于培養(yǎng)重組大腸桿菌菌株,提高質(zhì)粒產(chǎn)量
濾膜腸球菌瓊脂 250g 用于水或其他樣品中腸球菌的濾膜法分離或計數(shù)
雜交瘤細(xì)胞;WXR培養(yǎng)*ICAM-2/CD102ELISAKit大鼠細(xì)胞間粘附分子2規(guī)格:48T
*ICAM-3/CD50ELISAKit大鼠細(xì)胞間粘附分子3規(guī)格:48T
*PAI-1ELISAKit大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1規(guī)格:48T
*PAIELISAKit大鼠纖溶酶原激活物抑制因子規(guī)格:48T
*FDPELISAKit大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物規(guī)格:48T
*TMELISAKit大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白規(guī)格:48T
*PDGFELISAKit大鼠血小板衍生生長因子規(guī)格:48T
*OxLDLELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白規(guī)格:48T
*PAFELISAKit大鼠血小板活化因子規(guī)格:48T
*PIIINTELISAKit大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽規(guī)格:48T
冷凍保存細(xì)胞之方法:
雜交瘤細(xì)胞;WXR培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。