人子宮成纖維細胞提取物培養(yǎng)在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

產(chǎn)品名稱	人子宮成纖維細胞提取物培養(yǎng)
英文名稱	Human Uterine: Normal Uterine Fibroblast Derivatives
貨號	EYX99033

人子宮成纖維細胞提取物【Human Uterine: Normal Uterine Fibroblast Derivatives】

人子宮成纖維細胞提取物是從人子宮成纖維細胞提取的，人子宮成纖維細胞從正常人子宮組織制備。正常人子宮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

移液管7-Anilino-hydroxy-naphthalenesulfonic acid117-苯胺基-羥基-萘磺酸

移液器架Benzanilide938苯甲酰苯胺

櫻花記號筆 紫色Benzoin1193安息香

熒光定量封板膜張/盒 張/盒 0張/盒3-Benzalphthalide57513-亞芐基苯酞

載玻片片/盒L-Aspartic acid564L-天門冬氨酸
Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%  兔子白介素2elisa試劑盒   兔子白介素2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子白介素2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子白介素2試劑盒、兔子白介素2elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

β-Sitosterol  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  人α2巨球蛋白elisa試劑盒   人α2巨球蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人α2巨球蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人α2巨球蛋白試劑盒、人α2巨球蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Thevetin B  中文名：  分子式：C42H66O18  度：97.5%  兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit  

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISAKit  

Dregeoside A11  中文名：  分子式：C55H88O22  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISAKit
硬脂酸鎂  Magnesium stearate  質(zhì)量規(guī)格：BR 甲基纖維素細胞克隆試劑盒10/50/80

孔雀石綠鹽酸鹽(>90%,BS)  Malachite green hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>90%,BS 甲萘醌溶液(1毫摩爾)50毫升

無水硫酸錳(>98%,BR)  Manganese (II )sulfate anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 甲紫(cresylviolet)復(fù)染試劑盒50

丙硫異煙胺  Prothionamide  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR 簡單細菌酚品紅染色試劑盒50

丙硫異煙胺(標準品)  Prothionamide  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品 簡單細菌甲基藍染色試劑盒50

重水,氧化氘(0.55ml*10)  Deuterium Oxide  質(zhì)量規(guī)格：D,99.9% 簡單細菌結(jié)晶紫染色試劑盒50

重水,氧化氘(0.6ml*10)  Deuterium Oxide  質(zhì)量規(guī)格：D,99.9% 簡易化學(xué)法冰凍切片抗原修復(fù)處理試劑盒50

重水,氧化氘(0.6ml*10)  Deuterium Oxide  質(zhì)量規(guī)格：D,99.96% 簡易化學(xué)法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒50

重水,氧化氘(10G)  Deuterium Oxide  質(zhì)量規(guī)格：D,99.96% 膠原蛋白酶消化試劑盒20毫升

重水,氧化氘(25G)  Deuterium Oxide  質(zhì)量規(guī)格：D,99.9% 膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒MonkeyCollagenaseIELISAKit 96T/48T
人子宮成纖維細胞提取物培養(yǎng)Tanshinone IIB  17397-93-2  中文名：丹參酮IIB  分子式：C19H18O4  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  神經(jīng)保護; 抗氧化; 丹參; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒  

Tanshinone IIA  568-72-9  中文名：丹參酮IIA  分子式：C19H18O3  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 丹參; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒           

Tanshinone I  568-73-0  中文名：  分子式：C18H12O3  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit  

Sunitinib malate  341031-54-7  中文名：蘋果酸舒尼替尼  分子式：C26H33FN4O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISAKit  

Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名：磺胺喹噁啉  分子式：C14H12N4O2S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISAKit

 運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。