詳細介紹
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)圖片準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
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產品描述:
細胞名稱 兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)圖片
形態特性上皮樣
生長特性貼壁生長
特征特性
培養條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況
凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養法(-)
STR-
同工酶
染色體
注意事項:
?1.一般客戶拿到兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)圖片后,應該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發;
(2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發;
(3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發;
(4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發;
(5)細胞培養時經其它處理的,不重發;
(6)細胞收到2天內,未告知,不重發;
(7)視具體情況而定。
RN-h, 大鼠海馬趾神經元
RPS6KA6 Others Human 人 RSK4 / RPS6KA6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人成纖維細胞;HFF
SPA-A1細胞,肺腺癌細胞 人非小細胞肺腺癌細胞,NCI-H1975細胞 CL-0452T/G HA-VSMC(人血管平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2
中國倉鼠卵巢細胞;CHO
FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人細胞裂解液 (陽性對照)
兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)圖片CL-0373KiMA(人胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2
CNKSR3 Others Human 人 MAGI1 / CNKSR3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人肝細胞總RNAHH NA
大耳山羊皮膚細胞;LDG-3 B淋巴細胞,WEHI 22.1細胞 M5076細胞,小鼠網織細胞肉瘤
人胚肺二倍體細胞;HEL-2
HA Others H11N2 甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
冷凍保存細胞之方法:
兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。