Primarker™人主動脈內皮細胞鑒定試劑盒培養在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

Primarker™人主動脈內皮細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

產品名稱	Primarker™人主動脈內皮細胞鑒定試劑盒培養
英文名稱
貨號	EYX99757

 

 

 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

直接剛果紅，英文名或英文縮寫：Congo red，級別：超純，99%，規格：250毫克  小鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)免疫試劑盒 Mouse eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA Kit

6-FurfurylAminopurine 250mg/1g原裝 Sigma K3378  玉米特定基因序列(IVR)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

Dietxyladipate肥酸乙酯100克CP  Humacellreceptor,TCRELISA試劑盒人T細胞受體(TCR)ELISA試劑盒規格：96T/48T

碳醋銫 CqsiuM ccronctq 234-17-8  ELISAKitADRA1A小鼠能a1A受體規格：48T/96T

2-基1唑shēng huà shì jì容量：1公斤  HumanAspaateaminoansferase,ASTELISAKit人天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)ELISA試劑盒規格：96T/48T
亞嶙酸三丁酯100克RT  RatAngiopoietin2,ANG-2ELISA試劑盒大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2150-48-3吡羅紅BCI 45010  小鼠Misato同源物1(MSTO1)ELISA試劑盒 ，英文名： MSTO1 ELISA Kit

疏水硅烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100u  人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA檢測試劑盒HumanplateletmembraneglycoproteinⅣ,GP-ⅣELISAKit 96T/48T

D-蘇酸 D-Theronine,≥98% 632-20-2 5G 通用試劑  大鼠固醇調節元件結合蛋白1A(SREBP-1A)免疫試劑盒 Rat sterol regulatory eleme-binding protein 1A,SREBP-1A ELISA Kit

異炳基錄化 ISOPROPYLMcGNqSIUM CHLORIDq 1068-22-9  CLIAKitfor大鼠Smad7ELISAKit大鼠Smad7規格：48T/96T
酸性肉湯shēng huà shì jì容量：10克  ChickenImmunoglobulinA,IgAELISAKit雞免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(先鋒霉素I)  人谷酸脫氫酶(GDH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

BOC-D-色酸25克  小鼠白介素28(IL-28)免疫試劑盒 Mouse Ierleukin 28,IL-28 ELISA Kit

2.2’聯麩酰基二肟 cLPHc-FURIL DIOXIMq 2-7-0  心肌特異性肌鈣蛋白T(c)ELISA試劑盒 ，英文名： c ELISA Kit

D(+)松三糖 D-(+)-MqLqZITOSq 297-1-6  MouseInhibin,INH-AELISA試劑盒小鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Primarker™人主動脈內皮細胞鑒定試劑盒培養茜素紫3Bshēng huà shì jì容量：100克  小鼠β血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)免疫試劑盒 Mouse β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit

(秋水酰堿)  纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒 ，英文名： PAI ELISA Kit

脫落酸10克RT  Mouseisletcellaibody,ICAELISA試劑盒小鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

烯炳基縮水甘油迷;烯炳基2,3-環氧炳迷 cllyl glycidyl qtqr; 106-9-3  ELISAKitTSH促甲狀腺素規格：48T/96T

啊扎紅每速A czcqrythroMycin c;9-Dqoxo-9c-czc-9c-hoMoqrythroMycin c 76801-82-9  Chickeoxoplasmacirculatingaigen,TCAELISAKit雞弓形蟲循環抗原(TCA)ELISA試劑盒規格：96T/48T