人胰腺癌組織提取物培養在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

產品名稱	人胰腺癌組織提取物培養
英文名稱	Human Cancer: Pancreatic Cancer Tissue Derivatives
貨號	EYX99357

人胰腺癌組織提取物【Human Cancer: Pancreatic Cancer Tissue Derivatives】

導管腺癌占胰腺癌的80％～90％，主要由分化不同程度的導管樣結構的腺體構成，伴有豐富的纖維間質。有腺腔樣分化的區域，可有少量粘液，腫瘤的間質含有豐富的和Ⅳ型膠原。公司科技提供來自新鮮或冷凍人胰腺癌組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

PCR反應試劑盒(00bp)   次4,5-Dimethoxy-cyanobenzocyclobutane3524

pfu DNA聚合酶   0U/5×0U4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride287831

Real Taq DNA聚合酶   0U /5×0U 4,4'-Dimethoxytrityl chloride61564,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷

Taq plus DNA聚合酶   0U/5×0U4,4'-Diaminodiphenylsulfone84,4'-二氨基二苯砜

M-MLV(RNase H-) 反轉錄酶 00U 4,4'-Cyclohexylidenebisphenol84354,4'-環亞己基雙苯酚
Docetaxel  中文名：多西他賽  分子式：C43H53NO14    豬生長激素(GH)ELISA試劑盒  

D-Mannitol diacetonide  中文名：  分子式：C12H22O6    豬上腺素(EPI)ELISA試劑盒           

DL-Alanyl-DL-Mine  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S    豬瘦素elisa試劑盒   豬瘦素試劑盒   規格型號：96T/48T   豬瘦素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬瘦素試劑盒、豬瘦素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

DL-2-Amino-n-octanoic acid  中文名：DL-2-氨基正辛酸  分子式：C8H17NO2    豬食欲素受體elisa試劑盒   豬食欲素受體試劑盒   規格型號：96T/48T   豬食欲素受體試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬食欲素受體試劑盒、豬食欲素受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Diphenhydramine hydrochloride  中文名：鹽酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO    豬食欲素elisa試劑盒   豬食欲素試劑盒   規格型號：96T/48T   豬食欲素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬食欲素試劑盒、豬食欲素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。
屈螺酮  Drospirenone  質量規格：>98%,USP grade 大鼠γ氨基(GABA)ELISA檢測試劑盒RatGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T

屈螺酮（標準品）  Drospirenone  質量規格：HPLC>98%,標準品 大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測試劑盒RatIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T

炔雌醇(標準品)  Ethiny Estradiol  質量規格：>98%標準品 大鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA檢測試劑盒Ratierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 96T/48T

炔雌醇  Ethiny Estradiol  質量規格：>98%,可用于細胞培養 大鼠阿立新A(OrexinA)ELISA檢測試劑盒RatOrexinAELISAKit 96T/48T

乙硫異煙胺,硫異煙胺  amide  質量規格：>98.5% 大鼠癌標志物-CA153ELISA檢測試劑盒RatmammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit 96T/48T

乙硫異煙胺,硫異煙胺（標準品）  amide  質量規格：HPLC>98%,標準品 大鼠癌標志物-CA153試劑盒 Rat mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA Kit

依曲韋林  Etravirine  質量規格：>98% 大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA檢測試劑盒Ratiduronatesulfatase,IDSELISAKit 96T/48T

法莫替丁  Famotidine  質量規格：>98% 大鼠白介素10(IL-10)ELISA檢測試劑盒RatIerleukin10,IL-10ELISAKIT 96T/48T

法莫替丁(標準品)  Famotidine  質量規格：含量測定 大鼠白介素18(IL-18)Elisa檢測試劑盒RatIerleukin18,IL-18ElisaKit 96T/48T

非布索坦  Febuxostat  質量規格：≥99% 大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA檢測試劑盒RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 96T/48T
人胰腺癌組織提取物培養γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒              6-Aminoquinoxaline  中文名：6-氨基喹喔啉  分子式：C8H7N3 

兔子β血小板球蛋白elisa試劑盒   兔子β血小板球蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子β血小板球蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子β血小板球蛋白試劑盒、兔子β血小板球蛋白酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  6-Aminoquinoxaline  6298-37-9  中文名：6-氨基喹喔啉  分子式：C8H7N3  度：98.0%   

兔子β血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)ELISAKit     4-Amino-N-methylbenzamide  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%

兔子α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒     6-Aminopenicillanic acid  551-16-6  中文名：6-氨基青霉烷酸  分子式：C8H12N2O3S  度：98.0%   

兔子α2抗纖溶酶elisa試劑盒   兔子α2抗纖溶酶試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子α2抗纖溶酶試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子α2抗纖溶酶試劑盒、兔子α2抗纖溶酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  6-Aminonicotinic acid  3167-49-5  中文名：6-氨基煙酸  分子式：C6H6N2O2  度：98.0%

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。