大鼠角膜組織提取物說明書在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

產(chǎn)品名稱	大鼠角膜組織提取物說明書
英文名稱	Eye: Normal Rat Corneal Derivatives
貨號(hào)	EYX99470

大鼠角膜組織提取物【Eye: Normal Rat Corneal Derivatives】

角膜組織是是位于眼球前壁的一層透明膜，為眼睛提供大部分屈光力。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠角膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

5×A-plus MasterMix 5×加A反應(yīng)液   次 4-Acetylbiphenyl9214-乙酰基

5M 甜菜堿溶液 PCR級(jí)   5×1ml 4-Acetamidophenol對(duì)乙酰氨基酚

BSA溶液 PCR級(jí)   5×1ml 4-[2-[(3-Ethyl-methyl-oxo-pyrrolin-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide11189

DMSO-PCR級(jí)   5×1ml 4-[2-(2-Amino,7-dihydro-oxoH-pymol[2,3-d]pyrimodin-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester155

dNTP mM   0.5ml4-[(4-Methylpiperazin-yl) methyl]benzoic acid dihydrochloride62619甲磺酸伊馬替尼
Capecitabine 2',3'-diacetate  162204-20-8  中文名：  分子式：C19H26FN3O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    線粒體解偶聯(lián)蛋白2   英文名稱：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   UCP2

Capecitabine  154361-50-9  中文名：卡培他濱  分子式：C15H22FN3O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞    小鼠細(xì)胞粘附分子-1   英文名稱：   vascuiar endothelial cells adhesion molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VCAM-1

Canrenone  976-71-6  中文名：坎利酮  分子式：C22H28O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠鳥酸脫羧酶   英文名稱：   Mouse Ornithine Decarboxylase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ODC

Candesartan methyl ester  139481-69-9  中文名：  分子式：C25H22N6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠卵清蛋白特異性IgE   英文名稱：   Mouse ovalbumin specific Immunoglobulin E   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OVA sIgE

Candesartan ethyl ester  139481-58-6  中文名：  分子式：C26H24N6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠氧化低密度脂蛋白   英文名稱：   Mouse oxidized Low Density Lipoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   oxLDL
氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D2ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氯化失車菊素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D2ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D3ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

葫蘆素B OBetaD葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D3ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甲基新苦木素 HPLC≥95% 20mg RatCyclosporineA,CsAELISAKit大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

,二去氫隱丹參酮 HPLC≥95% 20mg RatCyclosporineA,CsAELISA試劑盒大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丹參二醇A HPLC≥95% 20mg RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丹參二醇B HPLC≥95% 20mg RatCystatinC,Cys-CELISA試劑盒大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丹參二醇C HPLC≥95% 20mg RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丹參酸甲酯 HPLC≥95% 20mg RatCytochrome-C,Cyt-CELISA試劑盒大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
大鼠角膜組織提取物說明書線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣  Aurantio-obtusin  67979-25-3  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7 

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣  4,4'-Dimethoxytrityl chloride  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣  Aurantio-obtusin  67979-25-3  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  決明; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣  4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride  28783-41-7  中文名：  分子式：C7H10ClNS 

線粒體復(fù)合物V蛋白共沉淀分析試劑盒5次  2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  89282-12-2  中文名：  分子式：C5H4N2O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。