PrimaCell™大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒說明書在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

產(chǎn)品名稱	PrimaCell™大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒說明書
英文名稱
貨號	EYX99685

PrimaCell™大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

小鼠載脂蛋白A1(APOA1)ELISA試劑盒 ，英文名： APOA1 ELISA Kit  861691-37-4葒草素-2"-0-B-L半乳糖苷說明書  2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin

猴γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T  219944-46-4七葉皂苷D品牌  AescinIIB

犬基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)試劑盒 Dog maix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit  158732-55-9七葉皂苷C規(guī)格  Aescin IIA

英文名稱HumanVascuolarcelladhesionmolecule1ELISAkit人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)ELISAkit規(guī)格：96T/48T  土槿皮乙酸-葡萄糖苷  Pseudolaric acid B-O-β-D-glucopyranoside

化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒100  114590-20-4大豆皂苷Ba說明書  Soyasaponin Ba
14259-47-3香蜂草苷說明書  DidyMin    英文名稱RatHbA1cELISAKit大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)規(guī)格：96T/48T

14259-46-2蕓香柚皮苷說明書   Narirutin  英文名稱RatHaptoglobinELISAKIT大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)規(guī)格：96T/48T

142409-09-4Crovatin  Crovatin   英文名稱RatHaptoglobinELISAKIT大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)規(guī)格：96T/48T

14216-03-6常春藤苷C說明書  Hederacoside C   英文名稱RatHAELISAKIT大鼠透明質(zhì)酸(HA)規(guī)格：96T/48T

14216-03-6常春藤苷C品牌  Hederacoside C   英文名稱RatHAELISAKIT大鼠透明質(zhì)酸(HA)規(guī)格：96T/48T
英文名稱humanf-E3ELISAKIT人游離雌三醇(f-E3)規(guī)格：96T/48T  520-36-5芹菜素品牌  Apigenin

初級離心柱DNA回收試劑盒20  524-30-1秦皮苷規(guī)格  Fraxin

Rathemeoxygenase2,HO-2ELISA試劑盒大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  574-84-5秦皮素  Fraxetin

小鼠中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)ELISA試劑盒 ，英文名： ITIH5 ELISA Kit  531-75-9秦皮甲素說明書  Esculin

犬白介素18(IL-18)ELISA檢測試劑盒CanineIerleukin18,IL-18ELISAKIT 96T/48T  305-01-1秦皮乙素品牌  6,7-Dihydroxycoumarin
PrimaCell™大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒說明書84605-18-5環(huán)黃芪醇說明書  Cycloastragenol   組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

84272-85-55-O-甲基維斯阿米醇苷說明書  5-O-Methylvisammioside   組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

84-26-4吳茱萸堿說明書  Rutecarpine  組織HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

84104-71-2雷公藤內(nèi)酯甲別名：規(guī)格  Wilforlide A   組織HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

83-95-4茵芋堿說明書  Skimmianine  組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定性檢測試劑盒20

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。