PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細胞試劑盒說明書在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

產品名稱	PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細胞試劑盒說明書
英文名稱
貨號	EYX99681

PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

載玻片細胞組蛋白NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  13241-33-3新橙皮苷說明書  Neohesperidin

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISA試劑盒小鼠小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)ELISA試劑盒規格：96T/48T  13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside

小鼠載脂蛋白A4(APOA4)ELISA試劑盒 ，英文名： APOA4 ELISA Kit  三七總皂苷規格  Panax notoginsenosides

巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA檢測試劑盒MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit 96T/48T  133-05-1細辛脂素  Asarinin

犬甲狀腺素(T4)試劑盒 Canine thyroxine,T4 ELISA Kit  126-17-0澳洲茄胺說明書  Solasodine
15291-75-5銀杏內酯A規格  Ginkgolide A  英文名稱RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧誘導因子-1α(HIF-1α)規格：96T/48T

152743-19-6石吊蘭素品牌  Lysionotin  英文名稱RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧誘導因子-1α(HIF-1α)規格：96T/48T

152743-19-6石吊蘭甲素品牌  Lysionotin   英文名稱Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-pentagalloylglucose   英文名稱Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-O-五沒食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose   英文名稱Rathemeoxygenase-1ELISAKit大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)規格：96T/48T
英文名稱HumanangiotensinogenELISAKit人血管緊張素原(aGT)規格：96T/48T  69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉品牌  Tanshinone IIA-sulfonic 

化線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒20/200  53452-16-7王不留行黃酮苷規格  Vaccarin

RatIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規格：96T/48T  94987-08-3絞股藍皂苷  Stevenleaf

小鼠原鈣黏素15(PCDH15)ELISA試劑盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit  6024-85-7延胡索乙素說明書  Tetrahydropalmatine

猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測試劑盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T  6080-33-7鹽酸青藤堿品牌  Sinomenine
PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細胞試劑盒說明書81-54-9羥基茜草素品牌  Purpurin   組織CDK2/CYCLINA激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

81525-13-5連翹脂苷B品牌  Forsythoside B  組織CASEINKINASE1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

81-27-6番瀉苷A品牌  Sennoside A   組織CASEINKINASE1δ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80952-72-3（R型）人參皂苷Rg2品牌  20(R)Ginsenoside Rg2   組織BTK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80952-72-3(R型)人參皂苷Rg2  20(R)Ginsenoside Rg2   組織B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。