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人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77培養

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-20 14:32:37瀏覽次數:400次

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產品簡介

人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產品名稱人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77培養
形態特性   圓形
生長特性  懸浮生長
特征特性   Jurkat亞系,在植物凝集素刺激下可產生IL-2。 
培養條件   IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS
傳代方法   1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:8,11;D16S539:11;D18S51:13,21;D19S433:13,15.2;D21S11:31.2,33.2;D2S1338:19,23;D3S1358:15,16,17;D5S818:9;D7S820:8,10;D8S1179:12,14;FGA:19,20,21,22;TH01:6,9.3;TPOX:8,10;vWA:18;
同工酶  
染色體   
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
MLC1    英文名稱:    膜蛋白MLC1抗體    ?0.2ml
Phospho-MKP1 (Ser359)    英文名稱:    磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體    ?0.1ml
Phospho-MKP1 (Ser296)    英文名稱:    磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體    ?0.1ml
MLK3    英文名稱:    */*蛋白激酶MLK3抗體    ?0.1ml
Phospho-MLK3(Thr277 + Ser281)    英文名稱:    磷酸化*/*蛋白激酶MLK3抗體    ?0.1ml
MSK1    英文名稱:    有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體    ?0.2ml
Phospho-MSK1 (Ser360)    英文名稱:    磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體    ?0.1ml
Phospho-MSK1 (Ser212)    英文名稱:    磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體    ?0.1ml
Phospho-MSK1 (Ser376)    英文名稱:    磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激酶1抗體    ?0.1mlAnti-CD55/DAF/FITC  熒光素標記衰變加速因子CD55抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD56/FITC  熒光素標記CD56抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD56/NCAM1/FITC  熒光素標記神經細胞粘附分子1抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD57/FITC  熒光素標記抗CD57抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD58/LFA-3/FITC  熒光素標記淋巴細胞功能相關抗原-3抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD59/FITC  熒光素標記反應溶血膜抑制蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD62L/FITC  熒光素標記L選擇素抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD63/MLA1 /FITC  熒光素標記抗溶酶體膜糖蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD63/MLA1 /RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標記抗溶酶體膜糖蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml
Anti-CD66a/Cea-1/CEACAM1/FITC  熒光素標記癌胚抗原相關細胞粘附分子1抗體IgG    Multi-class antibodies    規格:     0.2ml

 

 


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