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人膀胱癌細胞；J82使用說明書

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更新時間：2017-01-20 22:13:29瀏覽次數(shù)：243次

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產(chǎn)品簡介

人膀胱癌細胞；J82使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 人膀胱癌細胞；J82使用說明書
形態(tài)特性   上皮細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   該細胞源自一名58歲患有膀胱移行細胞癌的白人男性。胞內(nèi)無橋粒，有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及突出絨毛，表達ras基因。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:2～1:10傳代，每周換液2～3次
傳代情況 P62
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11；D13S317：10，12；D16S539：11，12；D18S51：10，12；D19S433：12，13；D21S11：30；D2S1338：19；D3S1358：16，18；D5S818：12，13；D7S820：9，11；D8S1179：8，13；FGA：20，24；TH01：9.3；TPOX：11，12；vWA：17，18；
同工酶
染色體   異倍體，XY
使用權限 A類

產(chǎn)品名稱	人膀胱癌細胞；J82使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
人可溶性白細胞分化抗原38(sCD38)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人柯薩奇病毒IgG(Cox V-IgG)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗組織轉*酶抗體IgA（tTG-IgA）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體(ATA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗著絲點抗體(ACA/CENP)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA 試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝oc-D-*   CAS號：   37784-17-1   現(xiàn)貨供應
(3-溴丙基)*基*   CAS號：   3779-42-8   說明書
4,5-二甲基-1,3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮   CAS號：   37830-90-3   報價
4-氯*乙酯鹽酸鹽   CAS號：   37831-62-2   進口、國產(chǎn)
五氟丙酸鈉鹽   CAS號：   378-77-8   現(xiàn)貨供應
3,5-二叔丁基   CAS號：   37942-07-7   說明書
4-氨基-N-甲基芐胺   CAS號：   38020-69-8   報價
4-(N-BOC-氨基)苯硼酸   CAS號：   380430-49-9   進口、國產(chǎn)
二乙胺基三氟化硫   CAS號：   38078-09-0   現(xiàn)貨供應
2-羥基-6-甲基*   CAS號：   38116-61-9   說明書
吡硫鈉   CAS號：   3811-73-2   報價
異己酰氯   CAS號：   38136-29-7   進口、國產(chǎn)