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抗鼠CD4單克隆細胞;YTA 3.1.2使用說明書

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更新時間:2017-02-04 13:41:30瀏覽次數:248次

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產品簡介

抗鼠CD4單克隆細胞;YTA 3.1.2使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱抗鼠CD4單克隆細胞;YTA 3.1.2使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  抗鼠CD4單克隆細胞;YTA 3.1.2使用說明書
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   該細胞分佖CD4不同抗原決定簇單抗,用于CD4單抗的制備。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  同工酶鑒定
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
spho-NMDAR2B (Ser1480)    磷酸化*受體2B抗體
Phospho-NMDAR2B (Ser1303)    磷酸化*受體2B抗體
NDUFA10    NADH氧化還原酶輔酶10抗體
NCKAP1    膜相關的蛋白質HEM2抗體
Notch 2    跨膜受體蛋白Notch-2抗體
Phospho-IKB beta (Ser23)     磷酸化KB抑制蛋白β抗體
Phospho-NFKB1 (Ser903)    磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體
NEDD8    泛素樣蛋白NEDD8抗體
NFIC    核因子1C型抗體
phospho-NPTX1(Tyr344)    磷酸化神經細胞正五聚體1抗體紫茉莉Mirabilis jalapa    Mirabijalone D    none    485811-84-5    C18H14O7    ≥95%
紫茉莉Mirabilis jalapa    Zarzissine    none    160568-14-9    C5H5N5    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    3-Acetoxy-24-hydroxydammara-20,25-diene    3-乙酰氧基-24-羥基達瑪-20,25-二烯    143519-04-4    C32H52O3    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    3-Acetoxy-4,7(11)-cadinadien-8-one    (4R,4AS,6S,8AR)-6-(乙酰基氧基)-3,4,4A,5,6,8A-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲基乙亞基)-2(1H)-萘酮    104975-02-2    C17H24O3    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    3-Acetoxy-4-cadinen-8-one    3-乙酰氧基-4-杜松萜烯-8-酮    923950-05-4    C17H26O3    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    1,3,5-Cadinatriene-3,8-diol    去氫白菖烯-3,7-二醇    941227-27-6    C15H22O2    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    4-Cadinen-7-ol    4-杜松萜烯-7-醇    217650-27-6    C15H26O    ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum    9-Oxo-10,11-dehydroageraphorone    9-酮澤蘭素    79491-71-7    C15H20O2    ≥96%
紫堇Cordalis bungeana Turez.    Acetylcorynoline    乙酰紫堇靈    18797-80-3    C23H23NO6    ≥98%

 

 


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