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FMDV-O核酸檢測試劑盒方法

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產品簡介

口蹄疫病毒O亞型（FMDV-O）核酸檢測試劑盒方法在 37℃可保存72h；試劑在 4℃可保存7天；避免反復凍融，反復凍融次數不超過 7 次；試劑開瓶次數不超過 7 次。運輸采用干冰保持低溫，運輸時間不應超過 3 天。試劑盒日期見產品標簽。

詳細介紹

口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒方法個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
規格：40次/50次/100次
口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒方法1、什么是定量PCR？
以參照物為標準，對PCR終產物進行分析或對PCR過程進行監測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。
2、定量PCR定量的理論依據是什么？
特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數擴增過程越短，當擴增速率趨于穩定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結果：Y=X×2n 其中Y代表擴增產物量， X代表PCR反應體中的原始模板數 n為擴增次數；理論上PCR擴增效率為*，PCR產物隨著循環的進行成指數增長，但實際上：DNA的每一次復制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴增效率：E = 參與復制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環次數n≤30時，E 相對穩定，原始模板以相對固定的指數形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數期；隨著循環次數n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數形式增加，后進入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數擴增的因素都會影響擴增產物的量，使得PCR擴增終產物的數量與原始模板數量之間沒有一個固定的比例關系，通過檢測擴增終產物很難對原始模板進行準確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴增效率，n為循環數，Tn表示在n個周期后PCR產物的數量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產物的數量，T0為原始模板數量。設定PCR到達指數擴增期時，產生一定的熒光(熒光依賴于某一循環擴增產物的總量，即特定的拷貝數K，為常數，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環數為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數，故上式為循環數（CP）對原始模板拷貝數的對數（lg T0）一次方程，其標準形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標準曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標準曲線：
口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒方法目前熒光定量PCR均采用外標定量
外標法定量PCR擴增效率的計算，由于標準曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標準曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結果，如下圖所示。另外也可直接根據系列稀釋外標在該次實時熒光PCR的結果來大略分析擴增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標在PCR擴增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴增到指數期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據PCR擴增過程中是否加入某種標記物、標記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標記定量，③酶標記定量檢測法，④熒光定量PCR技術
熒光定量PCR 主要原理發射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結合發光的熒光大增強。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發射波長大約為520nm。PCR擴增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結合發光，對PCR反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發生。 SYBR Green I的優點：SYBR Green I的優點是因為其缺點產生，由于它能所有的雙鏈DNA相結合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術進行定量？它與傳統的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴增范圍內（只有在此范圍內PCR產物信號才與初始模板的拷貝數成比例）。（2）一旦線性擴增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結果。為了保證線性，研究者要擴增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴增循環數作適當的調整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應，即用相似的引物與目標產物共擴增，而擴增產物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進行檢測。（3）大多數是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經過對數期擴增到達平臺期時，檢測重現性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗，所得結果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量；雖然加入內標后，可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統定量PCR的缺點是：勞動強度大、定量不準確、重復性差。
豆科植物紅車軸草 (ifolium pretense L.)全草 ifolin 三葉豆苷 23627-87-4 C21H20O11 ≥98%

3-酰基-11-同基乳香醋3ccqtyl11kqtoboswqllicccid20mg

木通本乙醇苷B;荷苞花苷B calceolarioside B 105471-98-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

對照品羅*130557-200502含量測定

(R型)原人參二醇 20(R)Protopanaxdiol 20mg HPLC≥98% 暫無簡介

和厚樸酚 35354-74-6 檢測用對照品無

洋金鳳Caesalpinia pulcherrima none 455255-15-9 C27H34O5 ≥95% 異心烷中工業溶液標準物質( 704

(?)-Huperzine A*102518-79-620mg/支

metxocarbamol *標準品532-03-6 200mg

云南松Pinus yunnanensis Daturabietaiene none 65894-41-9 C20H30O2 ≥95%

獐牙菜 Sweia bimaculata (Sieb.et Zucc.) Sweiamarine 獐芽菜苦苷 17388-39-5 C16H22O10 ≥98%

各塞定NqtworkScidingHPLC≥98%，20mg/支

槲皮苷;榭黃甙;槲皮甙;櫟素;橡皮苷 Querciin 522-12-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

對照品雙氫本甘安酸130434-200202檢查

Peonidin 3-glucoside chloride錄化葡萄糖苷芍藥素純度：>98%

大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISAKit 進口分裝人參皂苷Rd A0245 52705-93-8 HPLC≥98% 20mg/支

大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit 進口分裝乙酰哈巴苷 A0347 6926-14-3 HPLC≥95% 20mg/支

大鼠B因子(BF)ELISAKit 進口分裝人參皂苷CK A0450 39262-14-1 HPLC≥98% 20mg/支

大鼠雄烯二(ASD)ELISAKit 進口分裝綿馬貫眾素ABBA；東北貫眾素 A0553 12777-70-7 HPLC≥98% 20mg/支

中量全血基因組DNA提取試劑盒20rxn 進口分裝魚補體3（C3）ELISA試劑盒

內毒素清除劑EndotoxinRemovalSolution200rxn 進口分裝小鼠總*（TC）ELISA試劑盒

RNAmisimicRNA逆轉錄*鏈cDNA合成試劑盒25rxn 進口分裝小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒

λDNA/HindIII300μl(50rxn) 進口分裝小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒

口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒方法人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISAKit 進口分裝 *1-O-β-葡萄糖苷酸 Gemfibrozil 1-O-β-Glucuronide CAS號： 91683-38-4 質量規格：美國進口

人補體片斷3b(C3b)ELISAKit 進口分裝 *-d4 Gliclazide-d4 CAS號： 1185039-30-8 質量規格：美國進口

人補體片斷4b(C4b)ELISAKit 進口分裝外消旋順式-3-羥基*-d3,13C rac cis-3-Hydroxy Glyburide-d3,13C CAS號： 1217848-91-3 質量規格：美國進口

人補體片斷5b(C5b)ELISAKit 進口分裝外消旋反式-4-羥基* rac trans-4-Hydroxy Glyburide CAS號： 23155-04-6 質量規格：美國進口
口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒方法PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。