科研(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒方法個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
規(guī)格：40次/50次/100次
科研(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒方法1、什么是定量PCR？
以參照物為標(biāo)準(zhǔn)，對PCR終產(chǎn)物進行分析或?qū)?/span>PCR過程進行監(jiān)測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù)，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數(shù)期進行的。
2、定量PCR定量的理論依據(jù)是什么？
特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數(shù)擴增過程越短，當(dāng)擴增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結(jié)果：Y=X×2n 其中Y代表擴增產(chǎn)物量， X代表PCR反應(yīng)體中的原始模板數(shù) n為擴增次數(shù)；理論上PCR擴增效率為*，PCR產(chǎn)物隨著循環(huán)的進行成指數(shù)增長，但實際上：DNA的每一次復(fù)制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應(yīng)為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴增效率：E = 參與復(fù)制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環(huán)次數(shù)n≤30時，E 相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數(shù)形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數(shù)期；隨著循環(huán)次數(shù)n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數(shù)形式增加，后進入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數(shù)擴增的因素都會影響擴增產(chǎn)物的量，使得PCR擴增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個固定的比例關(guān)系，通過檢測擴增終產(chǎn)物很難對原始模板進行準(zhǔn)確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準(zhǔn)確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴增效率，n為循環(huán)數(shù)，Tn表示在n個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達指數(shù)擴增期時，產(chǎn)生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴增產(chǎn)物的總量，即特定的拷貝數(shù)K，為常數(shù)，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環(huán)數(shù)為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數(shù)即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數(shù)，故上式為循環(huán)數(shù)（CP）對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)（lg T0）一次方程，其標(biāo)準(zhǔn)形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標(biāo)上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線：
科研(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒方法目前熒光定量PCR均采用外標(biāo)定量
外標(biāo)法定量PCR擴增效率的計算，由于標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標(biāo)準(zhǔn)曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結(jié)果，如下圖所示。另外也可直接根據(jù)系列稀釋外標(biāo)在該次實時熒光PCR的結(jié)果來大略分析擴增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標(biāo)在PCR擴增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴增到指數(shù)期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數(shù)相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數(shù)得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據(jù)PCR擴增過程中是否加入某種標(biāo)記物、標(biāo)記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標(biāo)記定量，③酶標(biāo)記定量檢測法，④熒光定量PCR技術(shù)
熒光定量PCR 主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光大增強。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長大約為520nm。PCR擴增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環(huán)。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對PCR反應(yīng)中的非特異性擴增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。 SYBR Green I的優(yōu)點：SYBR Green I的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術(shù)進行定量？它與傳統(tǒng)的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統(tǒng)的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內(nèi)參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術(shù)的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴增范圍內(nèi)（只有在此范圍內(nèi)PCR產(chǎn)物信號才與初始模板的拷貝數(shù)成比例）。（2）一旦線性擴增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結(jié)果。為了保證線性，研究者要擴增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴增循環(huán)數(shù)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應(yīng)，即用相似的引物與目標(biāo)產(chǎn)物共擴增，而擴增產(chǎn)物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進行檢測。（3）大多數(shù)是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量；雖然加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統(tǒng)定量PCR的缺點是：勞動強度大、定量不準(zhǔn)確、重復(fù)性差。
千金藤Stephania japonica vibo-Quercitol (-)-vibo-環(huán)己五醇 488-76-6 C6H12O5 ≥98%

銀杏內(nèi)酯AGinkgolidqc1291-72-220mg

人參皂苷F3;人參皂甙F3 20(S)-Ginsenoside F3 62025-50-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100982-200701常溫，避光100mg

扁塑藤素 Pristimerin 1258-84-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

側(cè)柏Platycladus orientalis Totarol 桃柁酚 511-15-9 C20H30O ≥98%

鹽醋甜菜減Bqtcinqxy7nochloridq290-46-220mg

木蝴蝶苷A;千層紙苷A Oroxin A; Baicalin-7-glucoside 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

檢查用鄰本二甲100903-200601常溫，避光50mg

8-姜酚 8-Gingerol 23513-08-8; 30462-35-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

菖蒲Acorus calamus Shyobunone 菖蒲酮 21698-44-2 C15H24O ≥98%

大麥芽減Hordqninq20mg/支

對酸;酸，4-輕基肉桂酸 p-Coumaric acid 501-98-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100737-200501常溫，避光100mg

Pyrazinamide *標(biāo)準(zhǔn)品98-96-4 200mg

人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISAKit  進口分裝  6-巰基嘌呤  6-Mercaptopurine  CAS號：  50-44-2  質(zhì)量規(guī)格：  美國進口

牛丙檢測(e)ELISAKit  進口分裝  脫氫*  Dehydro Nicardipine Hydrochloride  CAS號：  59875-58-0  質(zhì)量規(guī)格：  美國進口

大鼠絲酸/蘇酸蛋白磷酸酶(STK)ELISAKit  進口分裝  鹽酸決奈達隆  Dronedarone HCl  CAS號：  141625-93-6  質(zhì)量規(guī)格：  美國進口

大鼠肝脂酶(HL)ELISAKit  進口分裝  *鹽;    A0039  53956-04-0    HPLC≥97.50%  20mg/支

腸道菌增菌肉湯(EE)  進口分裝  14-Hydroxy Carminomycin Oxalate  中文名稱：  14羥基洋*草酸  CAS 編號：    分子結(jié)構(gòu)式：  C28H29NO15

4-甲基傘形葡糖苷酸培養(yǎng)基（MUG培養(yǎng)基）  進口分裝  Acetaminophen Acetate (Acetaminophen Impurity)  中文名稱：  *（對乙酰基酚的雜質(zhì)）  CAS 編號：  2623-33-8  分子結(jié)構(gòu)式：  C10H11NO3

堿性蛋白胨水  進口分裝

科研18-4  Rutin  C27H30O16  610.5  Flavonoids  >=98%  20mg

*檢測試劑盒  進口分裝  94987-08-3  Gypenoside XLIX  C52H86O21  1047.23  Triterpenoids  >=98%  10mg

*檢測試劑盒  進口分裝  552-58-9  Eriodictyol  C15H12O6  288.25  Flavonoids  >=98%  20mg

呋喃它檢測試劑盒  進口分裝  107668-79-1  Bulley A  C35H49NO9  627.78  Alkaloids  >=98%  20mg
科研(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒方法PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。