羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
規(guī)格：40次/50次/100次
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法1、什么是定量PCR？
以參照物為標準，對PCR終產(chǎn)物進行分析或?qū)?/span>PCR過程進行監(jiān)測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù)，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數(shù)期進行的。
2、定量PCR定量的理論依據(jù)是什么？
特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數(shù)擴增過程越短，當擴增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結(jié)果：Y=X×2n 其中Y代表擴增產(chǎn)物量， X代表PCR反應(yīng)體中的原始模板數(shù) n為擴增次數(shù)；理論上PCR擴增效率為*，PCR產(chǎn)物隨著循環(huán)的進行成指數(shù)增長，但實際上：DNA的每一次復(fù)制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應(yīng)為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴增效率：E = 參與復(fù)制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環(huán)次數(shù)n≤30時，E 相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數(shù)形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數(shù)期；隨著循環(huán)次數(shù)n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數(shù)形式增加，后進入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數(shù)擴增的因素都會影響擴增產(chǎn)物的量，使得PCR擴增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個固定的比例關(guān)系，通過檢測擴增終產(chǎn)物很難對原始模板進行準確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴增效率，n為循環(huán)數(shù)，Tn表示在n個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達指數(shù)擴增期時，產(chǎn)生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴增產(chǎn)物的總量，即特定的拷貝數(shù)K，為常數(shù)，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環(huán)數(shù)為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數(shù)即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數(shù)，故上式為循環(huán)數(shù)（CP）對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)（lg T0）一次方程，其標準形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標準曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標準曲線：
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法目前熒光定量PCR均采用外標定量
外標法定量PCR擴增效率的計算，由于標準曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標準曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結(jié)果，如下圖所示。另外也可直接根據(jù)系列稀釋外標在該次實時熒光PCR的結(jié)果來大略分析擴增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標在PCR擴增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴增到指數(shù)期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數(shù)相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數(shù)得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據(jù)PCR擴增過程中是否加入某種標記物、標記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標記定量，③酶標記定量檢測法，④熒光定量PCR技術(shù)
熒光定量PCR 主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光大增強。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長大約為520nm。PCR擴增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環(huán)。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對PCR反應(yīng)中的非特異性擴增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。 SYBR Green I的優(yōu)點：SYBR Green I的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術(shù)進行定量？它與傳統(tǒng)的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統(tǒng)的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內(nèi)參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術(shù)的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴增范圍內(nèi)（只有在此范圍內(nèi)PCR產(chǎn)物信號才與初始模板的拷貝數(shù)成比例）。（2）一旦線性擴增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結(jié)果。為了保證線性，研究者要擴增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴增循環(huán)數(shù)作適當?shù)恼{(diào)整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應(yīng)，即用相似的引物與目標產(chǎn)物共擴增，而擴增產(chǎn)物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進行檢測。（3）大多數(shù)是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量；雖然加入內(nèi)標后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統(tǒng)定量PCR的缺點是：勞動強度大、定量不準確、重復(fù)性差。
威靈仙(綿團鐵線蓮) Clematis(Clematiswoollygroup) 2.5g

(E,E)-3,7-二基-10-(1-(q,q)-3,7-twomqthyl-10-(1-690-91-6HPLC≥98%，20mg/vial

Gold Taq DNA聚合酶 Gold Taq DNA聚合酶 暫不提供 暫不提供 250U，500U

含量測定*130520-2009022-8℃，避光100mg

酚;山柰酚;3,4',5,7-四羥基黃酮 Kaempferol 520-18-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

51-52-5 丙基硫氧嘧啶標準品 200mg

五味子酯SchisandrinB28246-22-7HPLC≥98%,20mg/支

YohiMbine 育亨賓 146-48-5

滅菌唑 標準品 CAS號：131983-72-7 10MG

山豆根色滿二氫黃酮Ⅰ HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

根皮素 60-82-2 檢測用對照品 無

刺桐Erythrina arborescens 3,4-二輕-5-輕基-9-(4-輕基本基)-2,2-二甲基-2H,10H-本并[1,2-b:3,4-b']二-10-同 65388-03-6 C20H18O5 ≥98% 異心烷中15種有機錄混合溶液標準物質(zhì)( 702

告達亭苷元告達亭甙元20mg/支

美司那相關(guān)物質(zhì)A標準品50mg

爆杖花'Rhododendron spinuliferum Daurichromenic acid (2S)-2-[(3E)-4,8-二甲基-3,7-壬二烯-1-基]-5-羥基-2,7-二甲基-2H-1-本并-6-羧酸 82003-90-5 C23H30O4 ≥95%

Cary-BlairTransportMedium  進口分裝  環(huán)己烷(色譜級)  Cyclohexane  CAS號：  110-82-7  質(zhì)量規(guī)格：  for HPLC,≥99.9%

LactosePeptoroth  進口分裝  石油醚(色譜級)  Petroleum   CAS號：  8032-32-4  質(zhì)量規(guī)格：  for HPLC,bp 30-60 °C

*麥康凱瓊脂添加劑1ml*5每200mlHB0121培養(yǎng)基中添加1支（含*0.01mg和亞碲酸鉀0.5mg）  進口分裝  1-十三烷磺酸[離子對色譜級]  IPC-ALKS-13  CAS號：  5802-89-1  質(zhì)量規(guī)格：  離子對色譜用試劑

TTC營養(yǎng)瓊脂  進口分裝  鉍試劑Ⅱ(CP)  Bismuthiol II  CAS號：  6336-51-2  質(zhì)量規(guī)格：  CP

人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素(MAT)ELISAKit  進口分裝  Fmoc-3-苯甲酰-赤-鞘醇  Fmoc-3-benzoyl-erythro-sphingosine  CAS號：  676485-58-8  質(zhì)量規(guī)格：  美國進口

人巨噬細胞刺激蛋白(MSP)ELISAKit  進口分裝  4-去甲氧基-4-硝基*硫化物  4-Desmethoxy-4-nitro Omeprazole Sulfide  CAS號：  142885-91-4  質(zhì)量規(guī)格：  美國進口

小鼠白介素4(IL-4)EL

羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法腦肽前體  進口分裝   戊菊酯  英文名稱：  Fluoride and cyanide  CAS號：  70124-77-5  分子式：  451.46  分子量：   C26H23F2NO4

骨涎蛋白  進口分裝   禾草敵  英文名稱：  Molinate  CAS號：  2212-67-1  分子式：  187.3  分子量：   C9H17NOS

β細胞素  進口分裝   硫線磷  英文名稱：  Cadusafos  CAS號：  95465-99-9  分子式：  270.39  分子量：   C10H23O2PS2

T細胞抑制因子  進口分裝   異辛烷中7種有機混和溶液  英文名稱：  7 kinds of organic  pesticides mixed solution  CAS號：    分子式：    分子量：