QuickTiter逆轉錄病毒定量試劑盒提供了一種測定逆轉錄病毒滴度的快速方法。該測定法測量逆轉錄病毒的病毒核酸含量，可以在純化病毒之前或之后進行。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒不涉及細胞感染；相反，它專門測量純化病毒或未純化病毒的病毒核酸含量上清液樣品（參見測試原理）。在未純化的病毒上清液的情況下，試劑盒是特別適用于在轉導步驟之前測定上清液滴度。該套件有檢測靈敏度極限為1.5 X 109病毒顆粒（VP）/mL，足以滿足中高滴度逆轉錄病毒樣本。整個過程大約需要60分鐘。每個試劑盒都提供足夠的試劑執行20次測試。QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒提供了一種快速定量的有效系統病毒上清液和純化病毒的逆轉錄病毒滴度。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉錄病毒定量試劑盒測定原理：

1.核酸消化

2.病毒下拉

3.蛋白質變性和病毒基因組釋放

4.定量

Cell Biolabs逆轉錄病毒定量試劑盒組件：

1. QuickTiter™ Solution A (Part No. 40020): One tube – 200 µL.

2. QuickTiter™ Retrovirus Solution B1 (Part No. 312001): One tube – 800 µL.

3. QuickTiter™ Retrovirus Solution B2 (Part No. 312002): One tube – 800 µL.

4. QuickTiter™ Solution C (2X) (Part No. 40023): Two tubes – 1.5 mL each

5. CyQuant® GR Dye (400X) (Part No. 105101): One tube – 50 µL.

6. QuickTiter™ Retrovirus RNA Standard (Part No. 312003): One tube – 500 µL containing 200

µg/mL retrovirus RNA Standard

存儲：將所有套件組件儲存在4oC。

試劑的制備：

•1X快速滴定儀™ 解決方案C：準備1X快速滴定儀™ 通過稀釋提供的2X溶液C在去離子水中貯存1:2。在室溫下儲存稀釋溶液。

•1X CyQuant®GR染料：根據包括逆轉錄病毒RNA標準樣品的測定數量。使用前立即準備1X CyQuant®GR染料，將提供的400X原液在1X TE中稀釋1:400。為了獲得最佳結果稀釋溶液應在制備2小時后使用。

標準曲線的制備：

1. 創建200µg/mL、100µg/mL，50µg/mL和25µg/mL的逆轉錄病毒RNA標準，…0µg/mL（1:2系列稀釋），標記9個微離心管#1至#9。

2.添加20µL 1X快速滴定儀™ 溶液C至2號管至9號管，轉移20µL 200µg/mL快速滴定儀™ 逆轉錄病毒RNA標準品至1號管和2號管。充分混合2號管，轉移20µL將混合物（100µg/mL）輸送至下一管。重復8號管的步驟，并將9號管用作坯料。

3.將每種稀釋液（包括空白）5µL轉移至適用于熒光計的微量滴定板上。添加將95µL 1X CyQuant®GR染料注入含有5µL樣品的每個孔中。其中熒光板讀取器使用480/520nm濾光片組。

結果示例：

下圖顯示了典型的定量結果。應使用以下數據僅供參考。該數據不應用于解釋實際結果。

圖：逆轉錄病毒RNA標準曲線。快速滴定儀™ 逆轉錄病毒RNA標準按照上述說明稀釋。熒光測量在SpectraMax Gemini XS熒光計（分子器件），帶485/538 nm濾光片組和530 nm切斷