核糖核酸酶 A物化性質:
物化性質 白色結晶或凍干粉,易溶于水,pI7.8,最適pH值7.7。穩定性:穩定 pH范圍2-4.5,冷藏凍干粉或結凍的酶液可保存數年活力不變。抑制劑有脫氧核糖核酸(競爭性抑制劑)、變性脫氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反應:專一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯鍵的裂開,形成具有2',3'-環磷酸衍生物寡聚核苷酸。
核糖核酸酶 A用途:
1、從 DNA:RNA 雜交體中去除未雜交的 RNA 區;
2、確定 RNA 或 DNA 中的單堿基突變的位置。在 RNA:DNA 或 RNA:RNA 雜交體中,若存在單堿基錯,可用 RNAseA 識別并切割。通過凝膠電泳分析切割產物的大小,即可確定錯配的位囂;
3、RNA 檢測。RNA 酶保護分析法是近年來發展起來的一種檢測 RNA 的雜交技術;
4、降解 DNA 制備物中的 RNA 分子。
艾美捷核糖核酸酶 A(WBC-LS003435)在胞苷殘基處的切割速度是尿苷殘基的兩倍(Richards和Wyckoff 1971)。Thr45被發現對介導嘧啶特異性最重要,既通過與嘧啶堿形成氫鍵,又在空間位上排除嘌呤堿(del Cardayré和Raines 1994)。Asp83的側鏈對于穩定含尿苷底物裂解過程中的過渡態很重要;這種殘留物對胞苷切割的動力學沒有影響(del Cardayré和Raines 1995)。
RNase A對嘧啶核苷鍵具有特異性(Volkin和Cohn 1953)。反應被認為分兩步進行。第一步,裂解3',5'-磷酸二酯鍵,同時生成2',3'-環磷酸二酯中間體。在第二步中,環磷酸二酯被水解成3'-單磷酸基團。第一步是關于底物的含氮堿的非特異性;然而,第二步對于末端為2',3'-環磷酸鹽的嘧啶核苷酸是絕對特異性的。RNase B與RNase A對環胞苷酸和酵母RNA具有相同的特異性(Plummer和Hirs 1963)。RNase A顯示出對較大底物的偏好(Nogués等人,1995)。
應特別注意酶的處理,因為它與玻璃表面的親和力。該酶保持活性,但在凍干時聚集,并在低離子強度的溫度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加熱溶液使DNA酶失活可能不令人滿意,因為如果發生沉淀形成并且熱處理的DNase可能會隨著時間的推移重新激活,RNA酶活性可能會喪失。代碼: RPDF 適用于需要最-低 DNase 和蛋白酶水平且無需進一步處理的應用。代碼: RAF在某些應用中無需處理即可使用。要熱處理 RAF,請使用 10mM 乙酸鹽 pH 5.0 和或不帶 15mM CaCl 2 在 15°C 或更長時間下在 100°C 下 80 分鐘。 如果在中性pH下加熱,可能會沉淀。代碼的熱處理:由于磷酸鹽的存在,RASE會沉淀。
核糖核酸酶 A部分引用文獻:
Andini, S. , D'Alessio, G. , DiDonato, A. , Paolillo, L. , Piccoli, R. and Trivellone, E.
Comparative Proton NMR Studies of Bovine Semen and Pancreas Ribonucleases , Biochim Biophys Acta 742 , 530 , 1983
Anfinsen, C. and White, F.
The Ribonucleases , in The Enzymes Vol. 5 , (Boyer, P., Lardy, H., and Myerback, K., Eds.) , Academic Press, NY , 95 , 1961
Anfinsen, C. , Redfield, R. , Choate, W. , Page, J. and Carroll, W.
Studies on the Gross Structure, Cross-Linkages, and Terminal Sequences in Ribonuclease , J Biol Chem 207 , 201 , 1954
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