艾美捷Fluorochorome熒光金(Fluoro-Gold)抗體的儲存和制備:
您將在一個小藥瓶中收到熒光金抗體。這是一種在兔體內培養的多克隆抗體。小瓶將含有約100µl的抗體溶液。您不會收到冷凍的抗體,但應立即冷凍并儲存在寒冷(-20oC)、黑暗、干燥的環境中。一旦溶液解凍以準備工作滴定度,不要再冷凍溶液。一臺好的商用冰箱的冷凍部分,沒有防凍功能,應該足夠了。如果適當且連續冷凍,抗體溶液可儲存長達一年。
抗體溶液應保持冷凍,直到可以使用。100µl抗體等分試樣的稀釋度為1/100。抗體可在BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS)中進一步稀釋1/50000至1/100000倍,以產生50ml至100ml的工作效價。這意味著你可以將收到的溶液稀釋500至1000倍。
如果您使用Vector精英套件,這將治療300至1000個切片。制備后,抗體溶液可在涼爽(4oC)、黑暗和干燥的環境中儲存長達七天。好的商用冰箱的冰箱部分應該足夠了。不建議在配制后七天內使用該溶液。
Fluorochorome熒光金(Fluoro-Gold)抗體的使用:
氟金可以用幾種不同的方法注射,包括壓力法、離子電滲法和各種研究人員開發的其他應用。參見Schmued和Fallon,Fluoro-Gold:“一種具有眾多獨-特財產的熒光逆行軸突示蹤劑",《大腦研究》,377(1986)147-154,以及Pieribone和Aston-Jones,“熒光金在深部腦核傳入研究中的離子導入應用",《腦研究》,475(1988)259-271。許多研究人員開發了自己的改進程序。抗體的使用不應依賴于使用熒光金的方法。
注射Fluoro Gold后,將漂浮切片(使用了灌注了4%甲醛的大鼠的30μm切片)與Fluoro金抗體溶液在4℃下孵育過夜。將切片清洗,然后在生-物-素化GAR(Vector Labs)中以1/1000在室溫下孵育1小時,然后再次清洗。然后將切片在Avidin/Biotin(Vector Labs)中以1/1000孵育1小時,洗滌并轉移至二氨基聯苯胺(.04%)和氯化鎳(2.5%)中的0.1M乙酸鈉和0.06%H2O2中6分鐘。然后清洗、安裝、干燥、脫水并蓋上蓋子。
根據經驗,如果按照上述方式儲存和制備,如果您使用Vector精英試劑盒,每小瓶抗體應處理300至1000個30μm的白化大鼠腦(或類似大小的動物)切片。然而,您應該嘗試集中注意力和程序,以確定哪一個最-適合您的環境。
熒光金(Fluoro-Gold)抗體根據不同規格分為單管和二管:
熒光金抗體-單管/100ul(FC20001)
熒光金抗體-2管/2x100ul(FC20002)
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