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上海古朵生物科技有限公司

昆蟲桿狀病毒表達系統的研究進展狀況

時間:2018-8-23閱讀:1105
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昆蟲桿狀病毒表達系統 (baculovirus expression vector system, BEVS) 以昆蟲桿狀病毒為外源基因載體, 昆蟲和昆蟲細胞為受體的表達系統。昆蟲細胞與哺乳動物細胞翻譯和翻譯后蛋白修飾的模式與能力相似,包括糖基化、磷酸化、酰基化、信號肽切除及肽段的切割和分解等,得到的重組蛋白抗原性、免疫原性和功能等生物活性與天然蛋白相似;能容納大分子的插入片段;容易實現大規模低成本生產。該系統日益受到人們的重視和廣泛應用。目前常用的 BEVS 系統有:

 

1. Bac to Bac 系統:基于 Luckow1993 年的方法,此系統采用桿狀病毒穿梭載體,利用了轉座子 Tn7 位點特異的轉座作用,使轉移載體和桿狀病毒 DNA 在大腸桿菌中生成重組桿狀病毒桿粒。隨后,將重組桿狀病毒桿粒轉染到昆蟲細胞內,生成重組桿狀病毒。

 

2. BaculoDirect 系統:線性化的桿狀病毒 DNA 兩端含有 attR 位點,且兩 attR 位點位點間有 HSV1 tk 基因,目的基因通過 Gateway 技術克隆到入門載體上,通過 LR 反應的重組 DNA 轉染昆蟲細胞,經更昔洛韋(ganciclovir)負選,得到含目的基因的重組病毒。

 

3. BacPAK6 和 BaculoGOLD 系統:這兩個系統都是將桿狀病毒 DNA 經 Bsu36 I 酶切后線性化,核衣殼編碼基因的 ORF1629 部分缺失,不能在昆蟲細胞中復制,和轉移載體共轉染昆蟲細胞后,通過同源重組,缺失的復制必需基因和外源基因一起重組到病毒 DNA 后,才能存活。但有時會有 AcNPV DNA 線性化不*,重組后仍需要通過空斑實驗篩選重組桿狀病毒。

 

4. FlashBAC 系統:第二代桿狀病毒表達系統,該系統缺失了 AcNPV DNA 復制必需基因(核衣殼編碼基因的 ORF1629)的一部分,用一段人工合成的基因(bacterial artificial chromosome,BAC) 替代多角體編碼區,改造后的環狀桿狀病毒不能在昆蟲細胞中復制,當與轉移載體共轉染昆蟲細胞后,通過同源重組重新獲得復制必需基因片段并將目的基因轉移到桿狀病毒基因組中,只有發生同源重組的病毒才能在昆蟲細胞中復制,從而實現在昆蟲細胞中一步法生產重組桿狀病毒,無需進行任何篩選。

 

因為重組原理相同,其中 flashBAC,BacPAK6 和 BaculoGOLD 這三個系統的轉移載體可以互換使用,方便各桿狀病毒表達系統之間的互換和嘗試。

 

 

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