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掌握這些過(guò)濾技巧,至少能讓實(shí)驗(yàn)效率提高一倍

時(shí)間:2018-8-24閱讀:1613
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過(guò)濾應(yīng)該是實(shí)驗(yàn)室中非常常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn),進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后必須掌握的基礎(chǔ)技能。特別是做一些分析型的檢測(cè)實(shí)驗(yàn),一般都會(huì)進(jìn)行稀釋和過(guò)濾。然而根據(jù)樣品量多量少的不同,需要選擇不同的過(guò)濾裝置。

可能很多小伙伴在做實(shí)驗(yàn)時(shí),只是按部就班,師兄師姐讓怎么做就怎么做,也沒(méi)有思考太多原因?yàn)槭裁匆菢幼觥D敲矗裉煳覀兙蛠?lái)系統(tǒng)地說(shuō)說(shuō)過(guò)濾的一些小妙招,知道這些,興許還會(huì)你之前的實(shí)驗(yàn),至少還能讓實(shí)驗(yàn)效率提高一倍呢。那么,先來(lái)說(shuō)說(shuō)針對(duì)小量樣品的過(guò)濾。


01、一次性針頭式過(guò)濾器
一次性針頭式過(guò)濾器與一次性注射器配套使用,可組裝成一個(gè)簡(jiǎn)易的過(guò)濾裝置,適用于液體量小的過(guò)濾,量大或者不溶物過(guò)多會(huì)導(dǎo)致堵塞,主要應(yīng)用于樣品的預(yù)濾,實(shí)驗(yàn)室生物流體、培養(yǎng)基和媒介添加劑的除菌過(guò)濾。


02、millipore 超濾離心管
蛋白濃縮和換 Buffer 通常使用超濾離心管,有多種品牌,但是常用的要屬 Millipore 品牌。Millipore 有多種型號(hào)的供選擇,選擇合適的超濾管,主要視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標(biāo)體積而定。


剛做實(shí)驗(yàn)的人員肯定會(huì)好奇到底選擇多大截留分子量比較合適呢?10kDa、5kDa、還是 30kDa?通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的 1/3,比如目的蛋白分子量為 35kDa,就可以選擇 10kDa 截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為 10kD 左右,則可以用截留分子量 3kD 的超濾管。使用時(shí),需要將超濾離心管放在離心機(jī)中,一定要注意質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡,且轉(zhuǎn)速不可太快,否則直接損壞超濾膜。超濾管是可重復(fù)使用的,使用一次就扔掉確實(shí)太浪費(fèi);但也不會(huì)使用太多次,一般也就用一兩次就換新的。


保存時(shí)要特別注意,將超濾離心管的超濾膜泡在疊氮鈉溶液或 20% 的乙醇溶液中,防止長(zhǎng)菌,而且防干,只要超濾膜浸了水,就不可以再讓它干,否則超濾膜的分子結(jié)構(gòu)就變了。切記不可以用超聲洗滌。
接下來(lái),要講的是針對(duì)大量樣品的過(guò)濾:一般是濾膜與濾杯配套使用。


03、微孔濾膜
一次性針頭式過(guò)濾器雖然方便,但是只能過(guò)濾少量樣品。當(dāng)需要大量過(guò)濾時(shí),可以選擇微孔濾膜結(jié)合進(jìn)行濾杯過(guò)濾。微孔濾膜主要用于樣品分析特別是色譜分析中流動(dòng)相及樣品的過(guò)濾,對(duì)保護(hù)色譜柱及輸液泵管路系統(tǒng)和進(jìn)樣閥等不被污染具有良好的作用。
目前已廣泛應(yīng)用在重量分析、微量分析、膠體分離及無(wú)菌實(shí)驗(yàn)中。與一次性針頭式過(guò)濾器一樣,膜的直徑分別有 47、50 mm,其孔徑分為 0.22、0.45 μm,同樣分為有機(jī)系和水系,過(guò)濾樣品時(shí)根據(jù)液體的性質(zhì)對(duì)應(yīng)選擇。


04、攪拌式超濾杯
在操作大體積樣本時(shí),Millipore 標(biāo)準(zhǔn)的 Amicon Ultra 超濾管(0.5/2/4/15mL)已經(jīng)明顯不能滿(mǎn)足需求,這時(shí)超濾杯就非常必要了。Amicon 攪拌式超濾杯方便好用,功能非常強(qiáng)大。比代超濾杯設(shè)計(jì)更加符合人體工程學(xué),組裝、拆卸以及開(kāi)關(guān)都極為方便。
配套膜片選擇更廣,包括超濾膜和微濾膜以及您自選的膜片。可進(jìn)行溫和濃縮、脫鹽、換液,更適合大體積病毒、外泌體/囊泡、蛋白溶液等樣品,同時(shí),提供操作視頻和中文指南,完備。另外,多種容量可選:50mL,200mL 和 400mL,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇。


05、真空過(guò)濾器
一次性真空式過(guò)濾器由透明高分子材料聚苯乙烯(GPPS)制成,利用真空泵提供壓力差,用于組織培養(yǎng)液和其他實(shí)驗(yàn)室流體溶液的大量過(guò)濾,樣品處理量可達(dá)數(shù)升,過(guò)濾后的樣品可直接以無(wú)菌的收集瓶保存。4 種上杯的過(guò)濾膜類(lèi)型可選:MCE、尼龍、PVDF 和 PES。膜孔徑范圍:0.10μm,0.22μm,0.45μm;外置有一個(gè)抽真空小孔,可一次性快速過(guò)濾大量實(shí)驗(yàn)流體。
過(guò)濾裝置穩(wěn)定,重心低,可防止樣品濺出。易讀取標(biāo)志顯示濾過(guò)容量。運(yùn)輸過(guò)程中,防塵塑料密封式袋子單個(gè)獨(dú)立內(nèi)包裝,不易污染。另外,可配有單獨(dú)的過(guò)濾器上杯和收集瓶,以供不同實(shí)驗(yàn)要求選用。


06、濾杯
這款濾杯可直接接藍(lán)蓋瓶,可反復(fù)使用。不需用抽濾瓶,接上真空泵可直接使用。收集瓶帶有刻度,濾過(guò)液可直接保存于收集瓶。可高壓滅菌,重復(fù)使用,更經(jīng)濟(jì)劃算。適用濾膜直徑為 47 毫米。使用時(shí),過(guò)濾樣品無(wú)需單獨(dú)清洗,有機(jī)溶液殘留會(huì)揮發(fā)掉,水溶液也會(huì)自行蒸發(fā)干。


07、多聯(lián)過(guò)濾器
多聯(lián)過(guò)濾器專(zhuān)為多個(gè)樣品同時(shí)過(guò)濾而設(shè)計(jì)制造。目前,國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室在對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾時(shí),一般采用玻璃材質(zhì)砂芯過(guò)濾裝置,這種方法每次只能過(guò)濾一個(gè)樣品,過(guò)濾速度慢,效率低,人工勞動(dòng)強(qiáng)度大。對(duì)于需要同時(shí)過(guò)濾多個(gè)樣品的操作者,選擇使用多聯(lián)過(guò)濾器更為方便。由于它的每一個(gè)過(guò)濾架均有獨(dú)立的控制閥門(mén),因此僅需用一個(gè)真空泵便可支持單聯(lián)或多聯(lián)同時(shí)操作。全不銹鋼材質(zhì)的多聯(lián)過(guò)濾器支架可在 180℃ 的高溫下進(jìn)行過(guò)濾操作;鋁合金夾子設(shè)計(jì)合理緊密,可以方便地將濾杯與中間過(guò)濾頭合在一起并保證嚴(yán)格密封而不會(huì)漏液。同時(shí),316L 衛(wèi)生級(jí)不銹鋼材質(zhì)耐酸堿,耐腐蝕,易于高溫消毒,使分析結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

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