對于細胞培養(yǎng)而言,血清的重要性顯而易見。它含有包括生長因子在內的蛋白、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他成份,可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。
胎牛血清(FBS)是細胞培養(yǎng)-常用的血清。
隨著生物學研究的迅猛發(fā)展,對血清的需求也越來越多,加上進口運輸成本增加等等各種原因,進口血清的價格在國內也是悄悄地蹭蹭地,站到了「不菲」的價位。
由于進口血清價格昂貴,購買渠道不明朗,市場上以次充好,假-冒問題等日益放大,所以研究人員所關注的因素有以下幾點:
1、 血清供應連續(xù)性
2、 血清批次一致性
3、 實驗數據的穩(wěn)定性
4、 價格是否有波動
5、 產品的完整性
注意:
在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動,使血清混勻,但不要產生泡沫!
與 4 ℃ 過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢?重點有二!
其一:關系到沉淀出現的幾率!
記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得!)試想,如果采用 4 ℃ 過夜的方法,1 瓶 500 毫升的血清融化好,大約需要 10 小時左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要 2.5 個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時間,而且大限度減少了血清沉淀出現的幾率。
血清融化過程中,蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白。
其二:血清在培養(yǎng)細胞中,重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循「快融」原則還是「慢融」原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4 ℃ 過夜需要大約 10 個小時(冰箱一般設 2-8 ℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。哪個速度對保留活性更好?不言而喻!
養(yǎng)細胞不易,選對好血清,更是養(yǎng)好細胞的頭等大事,希望以上信息對你有所幫助。
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