【古朵生物】elisa檢測(cè)中二抗時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)造成什么影響

　　二抗孵育

　　參考二抗的說(shuō)明書(shū)，按照適當(dāng)比例用封閉液稀釋辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗。

　　吸盡洗滌液后，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在搖床上緩慢搖動(dòng)孵育1~2小時(shí)?；厥斩?。然后加入Western洗滌液，在搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。

　　前2步洗滌是為了洗去一抗和二抗的非特異性結(jié)合，洗滌的效果直接影響結(jié)果背景的深淺，所以洗滌一定要干凈。洗滌液使用 TBST 或者 PBST,其中的 Tween20 有助于去除非特異性的結(jié)合，減少背景。同時(shí)短時(shí)間多次的洗膜比長(zhǎng)時(shí)間少次數(shù)的洗膜更有效。

　　第3步TBS洗滌是為了洗去膜上的Tween-20,因?yàn)樗梢宰璧K底物的沉積。

　　注意事項(xiàng)

　　1) 抗體保存注意事項(xiàng)：

　　2)收到抗體后按要求離心后再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存!

　　3)對(duì)于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃ .

　　4)分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，最少不能少于10 ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

　　5)復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在40℃，避免再凍起來(lái)!

　　6)絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。

　　7)大部分抗體收到后40℃短暫保存1-2周對(duì)抗體活性是沒(méi)有影響的。

　　8)長(zhǎng)期保存，加入疊氮納，防止細(xì)菌污染。

　　一抗/二抗使用問(wèn)題：

　　一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說(shuō)明書(shū)選擇的比例，一抗二抗的選擇直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及背景的深淺。要嚴(yán)格保證反應(yīng)時(shí)間，洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈，有利于降低背景;還要注意一抗二抗的匹配。

　　天然和非還原樣品問(wèn)題：

　　有些抗體只能識(shí)別的表位是非連續(xù)氨基酸，這些氨基酸雖然在蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中彼此不連續(xù)，但是在空間結(jié)構(gòu)中則是靠在一起的。這些抗體就只能識(shí)別靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)狀態(tài)。對(duì)于這些樣品，緩沖液和凝膠中就不能含有SDS,并且不能夠?qū)Φ鞍走M(jìn)行加熱變性。

　　Elisa試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶(hù)的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。