古朵解析影響ELISA試劑盒實驗的幾大因素

　　ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上 。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物 質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

　　影響ELISA試劑盒實驗的因素

　　技術(shù)人員通過幾年的實驗觀察，認(rèn)為影響ELISA實驗的因素有如下三方面：

　　一、試劑盒

　　1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;

　　2、酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高。

　　二、試驗儀器

　　1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會使結(jié)果忽高忽低;

　　2、每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機針孔有無堵塞。

　　三、操作

　　1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結(jié)果假性降低;

　　2、加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性;

　　3、洗滌不充分，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性;

　　4、比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高;

　　5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。

　　總之，由于ELISA試劑盒實驗的影響因素較多，在實際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗結(jié)果。

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