ELISA常見樣本的處理方法—組織樣本

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。利用ELISA進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿)，組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見ELISA組織樣本處理方法的整理，希望對您有所幫助。

　　組織樣本一般是制成組織勻漿，處理方法如下：

　　取適量組織塊，于預(yù)冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);

　　可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入 5-10ml預(yù)冷PBS(組織與 PBS 的質(zhì)量體積比建議為 1:5，即1g 樣本加入 5ml PBS)進(jìn)行充分研磨(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿)，該過程需在冰上進(jìn)行;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù) 2 次)。

　　將制備好的勻漿液于5000×g 離心5分鐘，留取上清即可檢測。

　　如果樣本需要長期保存，請?zhí)砑拥鞍酌敢种苿８鶕?jù)實(shí)驗(yàn)需要，組織勻漿樣本可先定量總蛋白，以便于統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本如肝臟，腎臟，腦組織會有假陽性反應(yīng)。

　　處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4℃保存應(yīng)小于 1 周，-20℃不應(yīng)超過 1 個月，-80℃不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的第一步，以上就是關(guān)于常見樣本處理方法的一個簡述，供研究者參考。

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